[发明专利]含有Fc的蛋白的纯化方法

权利要求书

1. 一种用于将抗体与其半抗体形式分离的方法，所述方法包括：

使用流动相使包含抗体及其半抗体形式的溶液与凝胶过滤基质接触，所述流动相具有约6.5至约7.5的pH，并且包含离液剂、糖醇、非极性氨基酸、和碱性氨基酸；和

从所述凝胶过滤基质中收集洗脱级分，其中所述抗体在一组洗脱级分中洗脱，并且所述其半抗体形式在另一组洗脱级分中洗脱，从而将所述抗体与所述其半抗体形式分离。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述离液剂是尿素、氯化胍、硫氰酸钠、硫氰酸钾或硫氰酸铵。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述离液剂是尿素。

4. 如权利要求3所述的方法，其中所述尿素以约2 M至约4.5 M的浓度存在。

5. 如权利要求4所述的方法，其中所述尿素以约4 M的浓度存在。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述糖醇是山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、或甘油。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述糖醇是山梨糖醇。

8. 如权利要求1所述的方法，其中所述糖醇以约1 M至约4.5 M的浓度存在。

9. 如权利要求8所述的方法，其中所述糖醇以约2 M至约2.5 M的浓度存在。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述碱性氨基酸是组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、或精氨酸。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述碱性氨基酸是精氨酸。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述非极性氨基酸是丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、或缬氨酸。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述非极性氨基酸是脯氨酸。

14. 如权利要求1所述的方法，其中所述碱性氨基酸和/或所述非极性氨基酸以约0.25M至约1 M的浓度存在。

15. 如权利要求1所述的方法，其中所述碱性氨基酸和/或所述非极性氨基酸以约0.5M的浓度存在。

16.如权利要求1所述的方法，其中所述流动相进一步包含盐。

17. 如权利要求16所述的方法，其中所述盐以约0.25 M至约0.8 M的浓度存在。

18.如权利要求16所述的方法，其中所述盐是氯化钠。

19. 如权利要求18所述的方法，其中所述流动相包含约2 M至约4.5 M尿素、约1 M至约4.5 M山梨糖醇、约0.25 M至约1 M精氨酸、约0.25 M至约1 M脯氨酸、和0.25 M至约0.8 M氯化钠。

20. 如权利要求19所述的方法，其中所述流动相包含约4 M尿素、约2.2 M山梨糖醇、约0.5 M精氨酸、约0.5 M脯氨酸、和约0.75 M氯化钠。

21.如权利要求1所述的方法，其中所述流动相具有约7.0至约7.4的pH。

22. 如权利要求1所述的方法，其中将所述流动相以约0.01 ml/min至约0.2 ml/min的流速应用于所述凝胶过滤基质。