[发明专利]抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体、rHPV68型蛋白抗原的检测试剂盒

说明书

本申请涉及生物检测的技术领域，具体公开了抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体、rHPV68型蛋白抗原的检测试剂盒。本申请公开了一种抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体，所述抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本申请利用上述抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体，提供了rHPV68型蛋白抗原含量的TRFIA检测试剂盒。利用该TRFIA检测试剂盒对rHPV68型蛋白抗原含量进行检测时，具有较强的特异性，且该检测方法的灵敏度、准确度和精密度较高。

技术领域

本申请涉及生物检测的技术领域，具体涉及抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体、rHPV68型蛋白抗原的检测试剂盒。

背景技术

人乳头瘤病毒(HPV)能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，可导致多种良性病变和恶性病变，低危型HPV感染可能导致尖锐湿疣，高危型HPV感染可能导致宫颈病变，甚至宫颈癌。HPV是一种小的球形环状双链DNA病毒，依据DNA的同源性进行分型，HPV亚型病毒有200多种，其中，有HPV16，HPV18，HPV31，HPV68等大约19种高危型病毒，HPV68在IARC致癌物分级中属于2A级。

在HPV疫苗的研制和生产过程中，需要建立鉴别抗原含量和体外相对效力等的检测方法。由于单克隆抗体具有较高的特异性和中和活性，目前这些检测方法一般均采用酶联免疫法，以单克隆抗体作为检测抗体的酶联免疫法较多。但酶联免疫法过程比较复杂，对操作人员素质要求较高，且外界条件对实验结果干扰较大，导致检测方法的特异性、灵敏度和准确性较低。

基于上述，亟需开发一种特异性强、灵敏度高，准确度高的检测方法对HPV型蛋白抗原进行测定。

发明内容

为了提高rHPV68型蛋白抗原含量检测方法的特异性、灵敏度、准确性，本申请提供抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体、rHPV68型蛋白抗原的检测试剂盒。

第一方面，本申请提供一种抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体，所述抗rHPV68L1蛋白CD68单克隆抗体的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

抗体的功能取决于其与抗原结合的表面位点，抗体因结合表面位点的不同而发挥特定的功能。因此，筛选特定位点的抗体，可对特定亚型的HPV蛋白抗原进行特异性的识别和检测。本申请利用所示的抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体，对检测rHPV68型蛋白抗原具有高度的特异性。

第二方面，本申请提供了上述抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体在检测rHPV68型蛋白领域的应用。

第三方面，一种rHPV68型蛋白抗原含量的TRFIA检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：以上述抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体作为一抗；以镧系元素离子标记的所述抗rHPV68 L1蛋白CD68单克隆抗体作为二抗；rHPV68型蛋白抗原标准样品。

本申请使用的时间分辨免疫荧光(TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间的两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大的提高了分析的灵敏度；且TRFIA检测方法具有较低的背景和较高的信噪比，有利于提高检测方法的灵敏度和准确性。

经过试验分析可知，当选择使用ELISA检测方法对rHPV68型蛋白抗原含量进行检测时，检测结果的回收率与100％相差较大，变异系数较高；而选择本申请使用的TRFIA检测方法对rHPV68型蛋白抗原含量进行检测时，检测结果的回收率与100％相近，变异系数较低，表明本申请提供的TRFIA检测方法能够有效提高检测结果的准确度和精密度。因此，本申请选择使用TRFIA检测方法对rHPV68型蛋白抗原含量进行检测。

优选地，所述检测试剂盒还包括一抗稀释液、二抗稀释液。