[发明专利]黄曲条跳甲致死基因Spt16及其应用

权利要求书

1.一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ IDNO.1的互补序列。

3.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ IDNO.1的至少19个连续核苷酸的片段。

4.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ IDNO.1的至少19个连续核苷酸的片段的互补序列。

5.一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取黄曲条跳甲总RNA，以提取的总RNA合成cDNA第一条单链，以cDNA第一条链为模板，进行RT-PCR扩增Spt16基因；扩增黄曲条跳甲Spt16基因片段的上游引物序列为SEQ IDNO.2(P1)，下游引物序列为SEQ ID NO.3(P2)，通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物，回收目标DNA片段；RT-PCR扩增体系为：5×Phusion GC Buffer 20μL,10mMdNTPs 2μL,DMSO 3μL,Phusion DNA Polymerase 1μL,cDNA模板2μL，ddH₂O 64μL，引物P1(SEQ ID NO.2)4μL，引物P2(SEQ ID NO.3)4μL。PCR反应程序为：98℃预变性30s；98℃变性10s，55℃退火20s，72℃延伸3min，35个循环；72℃延伸10min；

(2)将回收的目标DNA片段在DNA聚合酶的作用下插入至-Blunt Zero载体中，转化至大肠杆菌T1，涂布至含氨苄青霉素的LB固体培养基中，37℃培养过夜；

(3)挑选白色单菌落，以SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3为引物，进行菌落PCR，筛选阳性重组子，挑取菌落PCR鉴定为阳性重组子的单菌落于氨苄青霉素LB培养基中摇菌，提取质粒；

(4)利用全自动序列仪对质粒进行测序，得到SEQ ID NO.1所示的Spt16基因片段。

6.一种根据权利要求1-4中任一项所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16合成的dsRNA，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.4所示。

7.一种权利要求6所述的dsRNA的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：根据已验证的Spt16基因片段序列，设计并合成序列为SEQ ID NO.5的引物P3，序列为SEQ ID NO.6的引物P4，以含黄曲条跳甲致死基因片段Spt16的质粒为模板，PCR扩增得到扩增产物，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，得到目标DNA片段，采用试剂盒T7 High Yield RNATranscription Kit合成dsRNA。

8.一种如权利要求6所述的dsRNA在杀死黄曲条跳甲中的应用。