[发明专利]一种增强型单体StayGold蛋白及其应用

权利要求书

1.一种增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，该增强型单体StayGold蛋白序列为野生型二体StayGold蛋白的突变序列，且所述突变序列中的突变为N137、Q140、Y187中至少一个氨基酸进行突变成任意氨基酸。

2.根据权利要求1所述的增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，所述N137突变包括N137A、N137R、N137G、N137H、N137I、N137L、N137P和N137S。

3.根据权利要求1所述的增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，所述Q140突变包括Q140S、Q140A、Q140G、Q140H、Q140I、Q140L、Q140P和Q140Y。

4.根据权利要求1所述的增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，所述Y187突变包括Y187F、Y187A、Y187N、Y187D、Y187I、Y187L、Y187P、Y187S和Y187V。

5.根据权利要求1所述的增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，所述突变序列中的突变为以下四种情形之一：

(1)N137和Q140两个突变组合；

(2)N137和Y187两个突变组合；

(3)Q140和Y187两个突变组合；

(4)N137、Q140和Y187三个突变组合。

6.根据权利要求1所述的增强型单体StayGold蛋白，其特征在于，所述增强型单体StayGold蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

7.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1-6任一所述的增强型单体StayGold蛋白。

8.根据权利要求7所述的一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ IDNO.2所示。

9.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为含有如权利要求7-8任一所述的多核苷酸且能够翻译表达出如权利要求1-6任一所述增强型单体StayGold蛋白的表达载体。

10.根据权利要求9所述的一种重组质粒，其特征在于，所述表达载体为pET-28a载体。

11.一种蛋白表达系统，其特征在于，为转入权利要求10所述重组质粒的大肠杆菌BL21菌株。

12.一种如权利要求1-6任一所述的增强型单体StayGold蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1：利用基因合成技术获得StayGold蛋白的基因，将该基因构建在pET28a载体上，获得pET28a-6His-Strep II-TEV-GG-StayGold重组质粒；

步骤S2:以pET28a-6His-Strep II-TEV-GG-StayGold重组质粒作为模板，设计需要进行突变的氨基酸的饱和突变引物，进行PCR扩增，获得单体的StayGold基因的目的片段，将目的片段构建在pET28a载体上，获得StayGold饱和突变质粒；

步骤S3：利用大肠杆菌表达系统表达上述饱和突变体蛋白，利用荧光检测尺寸排除色谱FSEC鉴定出饱和突变中的单体StayGold蛋白，使用LC-MS检测饱和突变体的分子量鉴定出突变后概率较高的潜在氨基酸位点；

步骤S4：设计由LC-MS筛选出的潜在突变后氨基酸的定点突变引物，按照步骤S2获得单体突变蛋白，使用Ni-NTA亲和纯化的凝胶过滤层析验证后获得所述增强型单体StayGold蛋白。

13.一种如权利要求1-6任一所述的增强型单体StayGold蛋白在检测蛋白的标记、表达定位中的应用。