[发明专利]含水蛭、全蝎、僵蚕和/或土鳖虫的制剂的鉴别方法及其应用

权利要求书

1.含水蛭、全蝎、僵蚕和/或土鳖虫的制剂的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用UPLC-QqQ/MS对制剂的供试品溶液进行检测，获得MRM色谱图；

所述UPLC-QqQ/MS的条件包括：

液相色谱条件：色谱柱为Hss T3 C18色谱柱；柱温为30±5℃；以甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱；

质谱条件：ESI+模式，离子源温度为100～150℃，毛细管电压为2.5～3.5kV，锥孔电压为15～30V，除溶剂温度为400～500℃，除溶剂气体流速为800～1000L/h，采用多反应监测采集方式。

2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，还包括：将获得的MRM色谱图与特征图谱进行比对；

所述特征图谱的构建方法包括：

(a)采用UPLC-QTOF/MS采集水蛭、全蝎、僵蚕和土鳖虫各单味药的供试品溶液的总离子流色谱图；对所述总离子流色谱图进行预处理得到二维的离子强度图；

(b)对步骤(a)UPLC-QTOF/MS采集的数据进行主成分分析和正交偏最小方差分析，筛选出特征离子；

(c)根据步骤(b)得到的特征离子，在多反应监测模式下进行检测，获得特征离子的MRM色谱图，得到特征离子对。

3.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(a)中，所述UPLC-QTOF/MS的条件包括：

液相色谱条件：色谱柱为Hss T3 C18色谱柱；柱温为30±5℃；以甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱；

质谱条件：ESI+模式，离子源温度为100～150℃，毛细管电压为2.5～3.5kV，锥孔电压为15～30V，除溶剂温度为400～500℃，除溶剂气体流速为800～1000L/h，采用MS^Econtinuum采集方式，扫描范围50～1500amu；

优选的，步骤(c)中，所述检测的条件包括：ESI+模式，离子源温度为100～150℃，毛细管电压为2.5～3.5kV，锥孔电压为15～30V，除溶剂温度为400～500℃，除溶剂气体流速为800～1000L/h。

4.根据权利要求1或3所述的鉴别方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序包括：0～25min，流动相A的体积分数由97％变至80％；25～45min，流动相A的体积分数由80％变至50％。

5.根据权利要求1或3所述的鉴别方法，其特征在于，所述流动相A中，甲酸的体积分数为0.05％～0.15％；

和/或，所述梯度洗脱的流速为0.25～0.35mL/min；

和/或，所述色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.8μm。

6.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，所述制剂的供试品溶液为胰蛋白酶酶解液；各单味药的供试品溶液为各单味药的胰蛋白酶酶解液；

优选的，所述供试品溶液的制备包括：以水作为提取溶剂对制剂或各单味药进行提取处理，收集液体并蒸干，用碳酸氢铵溶液溶解，加入胰蛋白酶溶液，于37±1℃酶解10～14h。

7.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(a)中，所述预处理包括：归一化处理、峰对齐处理、峰提取处理和去卷积化处理；

优选的，所述预处理的参数设定为：保留时间范围为1～45min，质谱范围为50～2000。

8.根据权利要求1-3或6-7中任一项所述的鉴别方法，其特征在于，所述制剂还包括地龙；

优选的，所述制剂包括芪蛭通络胶囊。