[发明专利]重组纤连-胶原蛋白高纯度高效率制备方法在审
| 申请号： | 202210894993.6 | 申请日： | 2022-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN115651078A | 公开（公告）日： | 2023-01-31 |
| 发明（设计）人： | 余建军;赵铧 | 申请（专利权）人： | 浙江美尚洁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/78 | 分类号： | C07K14/78;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/36;C07K1/14 |
| 代理公司： | 北京智行阳光知识产权代理事务所(普通合伙) 11738 | 代理人： | 孙丽朋 |
| 地址： | 316041 浙江省舟山市定海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 胶原 蛋白 纯度 高效率 制备 方法 | ||
1.一种基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，获取表达融合纤连胶原蛋白Fibronectin-Collagen的毕赤酵母菌菌液；
S2，将毕赤酵母菌菌液离心，菌体沉淀重悬，超声破碎，再离心，得蛋白混合液；
S3，将该混合液经陶瓷膜过滤后，滤液柱层析分离得到纯的重组纤连胶原蛋白溶液；
S4，重组纤连胶原蛋白溶液经超滤膜浓缩脱水脱色除盐后可得到不同浓度的浓缩液，浓缩液经冷冻干燥可得目标蛋白。
2.根据权利要求1所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，在步骤S1中，毕赤酵母菌株选自：GS115、X33和KM71，最优选GS115菌株。
3.根据权利要求1所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，在步骤S2中，菌液离心参数为500-5000转每分钟，离心时间为5分钟到5小时。
4.根据权利要求1所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，在步骤S2中，超声功率为200w至4000w，破碎时间为30秒到3分钟，间歇30秒到3分钟。
5.根据权利要求1所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，在步骤S3中所述的层析为离子交换层析。优先HZ201阴离子交换树脂。并依次采用0mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、、0.6mol/L、、0.8mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，收集含目标产物的洗脱液。
6.根据权利要求1所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法，其特征在于，在步骤S4中所述的超滤膜规格为分子量5000-10000道尔顿规格。
7.权利要求1-6任一项所述的基因重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)的纯化方法所制备的重组纤连胶原蛋白(Fibronectin-Collagen)。
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