[发明专利]极端嗜热古菌重组HhH-GPD蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.极端嗜热古菌重组HhH-GPD蛋白，其特征在于：所述蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.编码如权利要求1所述的蛋白的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1或2所述的蛋白的制备方法，其特征在于：所述蛋白由能够表达Sis-HhH-GPD的基因工程菌产生，所用的菌株为E. coli BL21 (DE3) pLysS细胞。

4.如权利要求3所述的能够表达Sis-HhH-GPD的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、利用引物，以S. islandicus REY15A基因组为模板进行PCR扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果；所用的正向引物序列为：5'-CGCGGATCCATGGTTCGTAAAATACTTGAC -3'，反向引物序列为：5'-CCGCTCGAGTCACGAGGAATTTTCTCTATA -3'；

步骤2、对步骤1得到的PCR扩增产物和pET-28a Plus载体进行双酶切 (BamHI/XhoI)反应；

步骤3、通过琼脂糖凝胶电泳回收酶切后的PCR产物和pET-28a Plus载体片段，进行连接反应；

步骤4、将步骤3得到的连接产物转化到感受态细胞E. coli DH5α中，过夜培养，提取质粒进行测序验证，得到基因序列正确的克隆质粒；

步骤5、将基因序列正确的克隆质粒转化到感受态细胞E. coli BL21(DE3) plysS细胞中，得到能够表达Sis-HhH-GPD的基因工程菌。

5.如权利要求1至4任一项所述的蛋白在检测DNA甲基化中的应用。

6.根据权利要求5所述的蛋白在检测DNA甲基化中的应用，其特征在于：所述蛋白的分子量为26 kDa，能够专一性地切除DNA中的1-meA，并且能够进一步在所形成的无碱基位点处切开磷酸二酯键。

7.根据权利要求6所述的蛋白在检测DNA甲基化中的应用，其特征在于：所述蛋白能够在40^oC ～ 90^oC温度范围内切割含有1-meA的DNA。

8.根据权利要求7所述的蛋白在检测DNA甲基化中的应用，其特征在于：所述蛋白能够在pH 8.0 ～ 9.5范围内切割含有1-meA的DNA。