[发明专利]一种黄喉拟水龟卵巢细胞的分离培养方法有效
| 申请号： | 202210685154.3 | 申请日： | 2022-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN115181718B | 公开（公告）日： | 2023-03-31 |
| 发明（设计）人： | 刘晓莉;朱新平;徐红艳;王亚坤;李伟;洪孝友;于凌云;陈辰;徐昊旸 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 相凡 |
| 地址： | 510380 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 黄喉拟水龟 卵巢 细胞 分离 培养 方法 | ||
1.一种黄喉拟水龟卵巢细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）黄喉拟水龟卵巢组织依次经胶原蛋白酶Ⅰ型和胰蛋白酶消化后，终止消化反应，之后分离得到消化后细胞；
（2）所述消化后细胞在完全培养基中经原代培养和传代培养得到所述黄喉拟水龟卵巢细胞；所述完全培养基包括以下成分：杜氏伊格尔培养基13.5-14g/L、HEPES粉末4.76g/L、非必需氨基酸0.01-0.02mM、丙酮酸钠0.1-0.2mM、双抗penicillin/streptomycin 50-100μM、β-巯基乙醇100-150μM、亚硒酸钠1-2nM、胎牛血清150-200mL/L、鱼血清2-4mL/L、鸡血清10-15mL/L和Peprotech生长因子5-10ng/L。
2.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胶原蛋白酶Ⅰ型的工作浓度为1mg/mL。
3.根据权利要求2所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胶原蛋白酶Ⅰ型的消化时间为20min。
4.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胰蛋白酶的质量百分含量为0.025-0.25%。
5.根据权利要求4所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述胰蛋白酶的消化时间为5～20min。
6.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，利用胎牛血清终止消化反应。
7.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述完全培养基的pH为7.4～7.6。
8.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述原代培养和传代培养的培养温度为27～29℃。
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