[发明专利]一种具有改善水禽免疫力与肠道的无抗饲料添加剂及其制备方法

权利要求书

1.一种具有改善水禽免疫力与肠道的无抗饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、微藻的预培养：将微藻藻种经无菌操作接种于灭过菌的A0培养基中，使用光照培养，当藻液的光密度值OD达到600-700后，离心将微藻均分成三份进行培养；

S2、藻蛋白强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上时，离心后，将藻体转入A1培养基，再培养2-4天后，收获微藻A；

S3、藻脂类强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上时，离心后，将藻体转入A2培养基，采用无光-有光交替培养，培养5-7天后，收获微藻B；

S4、藻发酵强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上，离心后，将藻体转入A3培养基，进行发酵培养，测定生物量增加至200-350mg/L，再培养24-48h，得到微藻C；

S5、饲料添加剂配制：将步骤S2、S3和S4得到的微藻A、微藻B和微藻C分别进行干燥，混合，得到无抗饲料添加剂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

S1、微藻的预培养：将微藻藻种经无菌操作接种于灭过菌的A0培养基中，然后使用光照培养，当藻液的光密度值OD达到600-700后，离心将微藻均分成三份进行培养；

A0培养基成分为：NH₄Cl 600mg/L，KH₂PO₄70 mg/L，K₂HPO₄ 88mg/L，MgSO₄7H₂O 80mg/L，CaCl₂ 50mg/L，水1000mL，pH 7-8；

S2、藻蛋白强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，每天震荡3-4次，培养温度为20℃-30℃，光照强度为4500-6000Lux，培养4-6天，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上时，离心后，将藻体转入A1培养基，再培养2-4天后，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上，收获微藻A；

A1培养基成分为：改性的铁皮石斛粉末50-100mg/L，NH₄Cl 700mg/L，KH₂PO₄ 60mg/L，K₂HPO₄ 100mg/L，MgSO₄7H₂O 80mg/L，CaCl₂ 50mg/L，水1000mL，pH 7-8；

S3、藻脂类强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，每天震荡3-4次，培养温度为20-30℃，光照强度为4500-6000Lux，培养2-4天，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上时，离心后，将藻体转入A2培养基，采用无光-有光交替培养，有光培养条件为：培养温度20℃-30℃，光照强度6000-7000Lux，培养18-30h，震荡培养；无光培养条件为：150rpm震荡培养，每隔18-30h更换一次光线的开关，并在暗培养时加入脉冲超声波培养，在超声下培养10-20min，每天1-2次，培养5-7天后，收获微藻B；A2培养基成分为：板栗壳-改性高岭土100-200mg/L，NaNO₃ 100-200mg/L，KH₂PO₄ 60mg/L，K₂HPO₄ 100mg/L，MgSO₄7H₂O 80mg/L，CaCl₂ 50mg/L，水1000mL，pH 7-8；

S4、藻发酵强化培养：将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基，然后使用光照培养，每天震荡3-4次，培养温度为20℃-30℃，光照强度为4500-6000Lux，培养2-4天，测定氨氮去除率、总氮去除率分别为90％以上和70％以上，离心后，将藻体转入A3培养基，进行发酵培养，培养条件为：避光，150rpm震荡培养，培养24-48h后，测定生物量增加至200-350mg/L，再培养24-48h，得到微藻C；

A3培养基成分为：葡萄糖100-200mg/L，海藻酸钠100-150mg/L，NH₄Cl 100-200mg/L，KH₂PO₄ 60mg/L，K₂HPO₄100 mg/L，MgSO₄7H₂O 80mg/L，CaCl₂ 50mg/L，水1000mL，pH 7-8；

S5、饲料添加剂配制：将步骤S2、S3和S4得到的微藻A、微藻B和微藻C分别进行干燥，离心后，55℃-60℃烘干，按照微藻A、微藻B和微藻C的质量比为50-60：25-35：20-30进行混合，得到无抗饲料添加剂。