[发明专利]代谢工程改造产溶剂梭菌及其应用

权利要求书

1.重组菌株的构建方法，其特征在于，将表达载体导入保藏编号为GDMCC NO: 61493的产溶剂梭菌（Clostridium sp. ）WK，获得所述重组菌株；

所述表达载体包括编码α-乙酰乳酸脱羧酶的基因、梭菌特异性强启动子P_fdx和穿梭质粒pMTL83353；

所述表达载体的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述导入包括电转化，所述电转化包括如下步骤：

步骤（1）、用培养基将所述重组菌株培养至OD值为1.3~1.5，获得菌液；

步骤（2）、将质粒、甘油和步骤（1）所述菌液混合，获得混合菌液；

步骤（3）、对步骤（2）所述混合菌液进行电击，获得转化菌液；

步骤（4）、对步骤（3）所述转化菌液静置后与抗生素混合，培养，获得复苏菌液；

步骤（5）、将步骤（4）所述复苏菌液转移至含抗生素的筛选平板，完成电转化；

所述甘油浓度为10%；

所述静置的时间为8 h；

所述质粒的用量为4~8 μg；

所述电击的电压为1800V；

所述电击的脉冲时间为3.5 ms；

步骤（5）所述抗生素的浓度为125~800 μg/mL。

3.如权利要求1或2所述构建方法获得的重组菌株。

4.如权利要求3所述的重组菌株的发酵方法，其特征在于，包括：将所述重组菌株接种至梭菌基本培养基并与抗生素混合，恒温发酵，获得发酵液；

所述梭菌基本培养基含有30~60 g/L葡萄糖。

5.燃料的合成方法，其特征在于，取如权利要求3所述的重组菌株进行发酵，收集发酵产物，获得燃料。

6.如权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述燃料包括醇；

所述醇包括2,3-丁二醇、丁醇或乙醇中的一种或多种。