[发明专利]一组用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物、应用及筛选方法

权利要求书

1.一组用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为多种卵泡液差异蛋白，所述卵泡液差异蛋白包括上调蛋白和下调蛋白；

所述上调蛋白在PCOS人群中的表达量与其在可孕人群中的表达量的比值大于或等于1.2；

所述下调蛋白在所述PCOS人群中的表达量与其在所述可孕人群中的表达量的比值小于或等于0.83。

2.根据权利要求1所述一组用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物，其特征在于，所述上调蛋白包括抑制素βC链、泛酸酯酶、蛋白多糖4、血管紧张素原、含FERM和PDZ结构域的蛋白质1、淋巴管内皮透明质酸受体1、磷脂酰肌醇蛋白多糖-3、脑积水诱导蛋白同系物、胆碱酯酶、N-乙酰壳聚糖酶、神经细胞黏附分子L1中的至少一种。

3.根据权利要求1所述一组用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物，其特征在于，所述下调蛋白包括单核细胞分化抗原CD14、富含亮氨酸的α-2糖蛋白、嗅觉介质样蛋白3、层粘连蛋白亚单位α-1、细胞间黏附分子2、血管细胞粘附蛋白1、丝氨酸甘氨酸、钙黏蛋白-1、补体因子H相关蛋白2、补体因子H相关蛋白4、金属蛋白酶抑制剂2、胱抑素-M、胃蛋白酶A-4、钙黏蛋白-11、多药耐药相关蛋白9、免疫球蛋白重链变构3-15、转化生长因子β受体3型、软骨基质蛋白-2中的至少一种。

4.如权利要求1～3任意一项所述的一组生物标志物在评估PCOS人群的卵母细胞质量中的应用。

5.一种用于评估PCOS卵母细胞质量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有如权利要求1～3任意一项所述的用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物。

6.根据权利要求5所述一种用于评估PCOS卵母细胞质量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有4～5种所述上调蛋白和/或所述下调蛋白。

7.一种如权利要求1～3任意一项所述的用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、分别采集所述PCOS人群的卵泡液和所述可孕人群的卵泡液；

S2、将采集到的两组人群的卵泡液分别进行非标记蛋白质组学检测分析；

所述非标蛋白质组学检测分析的过程为，先提取卵泡液中的蛋白质，再对得到的蛋白质进行酶解得到肽段，再对肽段进行质谱分析；

S3、对步骤S2得到的质谱分析数据进行处理，筛选出在两组人群的卵泡液中具有显著的差异表达的蛋白，即得到所述用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物；

其中，筛选的标准为，蛋白质在所述PCOS人群中的表达量和所述可孕人群中的表达量的差异倍数≥1.2，或差异倍数≤0.83。

8.根据权利要求7所述一种用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物的筛选方法，其特征在于，

所述可孕人群为健康可孕人群，其不孕因素为男方因素。

9.根据权利要求7所述一种用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物的筛选方法，其特征在于，

所述步骤S2的具体过程为：

S2-1、提取蛋白质：采用去高丰度蛋白色谱柱对所述提取的蛋白进行预处理，得到去除了白蛋白、IgG和其他高丰度蛋白的蛋白质样品；

S2-2、采用BCA法测定所述蛋白质样品的蛋白浓度；

S2-3、对所述蛋白质样品进行还原烷基化处理；

S2-4、对进行还原烷基化处理后的所述蛋白质样品进行FASP酶解；

S2-5、将FASP酶解后的所述蛋白质样品进行脱盐处理；

S2-6、将脱盐处理后的所述蛋白质样品进行液质联用质谱分析。

10.根据权利要求7所述一种用于评估PCOS卵母细胞质量的生物标志物的筛选方法，其特征在于，所述步骤S2中，质谱分析包括洗脱分离肽段和质谱检测；其中，洗脱分离肽段采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱；

所述流动相A为体积比为1:1000的甲酸-水溶液，所述流动相B为体积比为1:1000的甲酸-乙腈溶液；

梯度洗脱前，先将酶解后的肽段用样品溶解液溶解，所述样品溶解液为体积比为1:1000的甲酸-水溶液；

梯度洗脱过程为，将溶解的肽段溶液充分振荡，取2ug进行液质联用质谱分析；分析时间为120min,流速为300nL/min；梯度洗脱条件如下，其中所述流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min,2％-8％B；5min-90min,8％-24％B；90min-110min,24％-32％B；110min-115min,32％-90％B；115min-120min,保持90％B；

梯度洗过结束后，采用质谱仪对分离后的肽段进行检测。