[发明专利]一种神经干细胞外泌体及其制备药物中的用途

权利要求书

1.一种神经干细胞外泌体在制备用于治疗脑缺血再灌注损伤药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述神经干细胞外泌体标志蛋白为CD9、CD63和TSG101，用于表达外泌体。

3.一种用于验证权利要求1～2任意一项所述用途中神经干细胞外泌体药效的动物模型构建方法，其特征在于，所述动物模型构建方法包括：利用大脑中动脉闭塞-再灌注大鼠模型进行神经干细胞外泌体对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的鉴定。

4.一种神经干细胞外泌体，其特征在于，所述神经干细胞外泌体大小为80nm，具有典型的双层膜结构，呈双凹圆盘状或椭圆形，囊泡因内容物不同呈现出不同的透亮度。

5.如权利要求4所述的神经干细胞外泌体，其特征在于，所述神经干细胞外泌体的平均粒径为64.47nm，且分布于40～120nm，呈相对正态分布，浓度为8.96*10⁹/ml。

6.一种神经干细胞外泌体提取及鉴定方法，其特征在于，所述神经干细胞外泌体提取及鉴定方法包括：

对神经干细胞进行培养并利用免疫荧光染色法进行鉴定后，使用qEVoriginal分离柱提取神经干细胞外泌体。

7.如权利要求6所述的神经干细胞外泌体提取及鉴定方法，其特征在于，所述神经干细胞外泌体提取及鉴定方法包括以下步骤：

步骤一，神经干细胞的培养及鉴定；

步骤二，神经干细胞外泌体的提取及鉴定；

步骤三，神经干细胞外泌体对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的鉴定。

8.如权利要求7所述的神经干细胞外泌体提取及鉴定方法，其特征在于，所述步骤一中的神经干细胞培养及鉴定包括：

选择人源性神经干细胞，用无血清培养基进行培养，并收集培养基；

用免疫荧光染色方法检测神经干细胞特异性标志物鉴别是否为神经干细胞。

9.如权利要求7所述的神经干细胞外泌体提取及鉴定方法，其特征在于，所述神经干细胞特异性标志物包括Nestin和Musashi1。

10.如权利要求7所述的神经干细胞外泌体提取及鉴定方法，其特征在于，所述步骤二中的神经干细胞外泌体提取及鉴定包括：

神经干细胞培养至第3代后开始收集细胞上清液，使用qEVoriginal分离柱提取神经干细胞外泌体；

运用透射电镜、纳米颗粒大小追踪分析鉴定神经干细胞外泌体及WesternBlot验证神经干细胞外泌体标志蛋白，并测定神经干细胞外泌体浓度。