[发明专利]基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.基于eATRP信号放大策略的CEA电化学检测试剂盒，其特征在于，包括以下原料：Apt1、Apt2、MCH、PEI、BMP、Me₆TREN、CuBr₂、KPF₆、FMMA、LiClO₄、EDC、NHS。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：DMSO、H₂SO₄、无水乙醇、PBS缓冲液、超纯水。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，

Apt1序列：5’-SH-(CH₂)₆-ATACCAGCTTATTCAATT-3’

Apt2序列：5’-AGGGGGTGAAGGGATACCC-3’。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，使用时，将部分原料配制为溶液，Apt1溶液浓度为1μM，Apt2溶液浓度为100μM，EDC溶液浓度为100μM，NHS溶液浓度为100μM，MCH溶液浓度为2mM，PEI溶液浓度为2mg/mL，BMP溶液浓度为2mM，KPF₆溶液浓度为0.1M，FMMA溶液浓度为10mM，CuBr₂/Me₆TREN溶液中CuBr₂和Me₆TREN的浓度均为10mM，LiClO₄溶液浓度为1.0M。

5.一种利用权利要求1-4任一项所述试剂盒检测CEA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)电极修饰

①将Apt1溶液滴加到金电极上，反应，洗涤，吹干；

②将步骤①的电极浸泡在MCH溶液中，反应，洗涤，吹干；

③将待检测样品滴加至步骤②的电极表面，反应，洗涤，吹干；

④将Apt2-PEI溶液滴加到步骤③的电极上，反应，洗涤，吹干；

⑤将BMP溶液滴加到步骤④的电极表面，反应，洗涤，吹干；

⑥将步骤⑤的电极浸泡在eATRP反应溶液中，在恒定电位下，用i-t曲线电化学聚合，随后用LSV方法处理电极，除去表面杂质；

(2)电化学测定

将修饰后的电极浸入LiClO₄溶液中，用SWV方法进行电化学检测，根据电信号大小分析CEA含量。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，金电极先进行预处理，预处理方法为：用0.3μm和0.05μm氧化铝粉分别对金电极表面进行抛光，然后，依次用超纯水、无水乙醇和超纯水超声清洗电极，将清洗过的电极在新配制的水虎鱼酸溶液中浸泡15min，并重复上述清洗步骤，清洗结束后取出，在0.5M H₂SO₄溶液中用循环伏安法处理电极，电位范围设定为-0.3～1.5V，扫描速率为0.1V/s，重复扫描直至得到重合的CV图，最后用超纯水清洗电极，用氮气吹干。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤①的反应温度为37℃，时间为2h；步骤②的反应温度为37℃，时间为0.5h；步骤③的反应温度为37℃，时间为1h；步骤④的反应温度为37℃，时间为1h；步骤⑤的反应温度为37℃，时间为25min；步骤⑥的聚合温度为室温，时间为40min；步骤(2)的SWV的扫描范围：0～0.8V，扫描速率：1.0V/s，电位增量：4mV。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，Apt2-PEI溶液的制备方法为：

将Apt2溶液、EDC溶液和NHS溶液等体积混合，然后加入到PBS缓冲液中，振荡活化，得到已活化的Apt2溶液；然后加入等体积的PEI溶液混合，振荡反应，得到Apt2-PEI溶液。