[发明专利]一种检测转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的方法

说明书

本发明公开了一种检测转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的方法，利用柱前衍生‑UPLC‑MS/MS‑内标法测定转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的检测方法；采用UPLC‑MS/MS，在电喷雾电离(ESI⁺)和多反应监测模式下测定，用同位素内标法进行定量分析，实现对转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸的快速分离和准确定性定量。本方法灵敏度高、回收率好、定性能力强、分辨率高，且前处理过程操作简单，能满足在线自动化检测的要求，从而达到绿色、高效、准确定性定量分析的目的。本方法操作简单、耗时较短、提取率好，更有效降低复杂基质成分的干扰、检出限低，适用于转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的日常检测工作。

技术领域

本发明涉及一种检测转基因大豆中草甘膦及其主要代谢物氨甲基膦酸残留的方法，属于农产品检测技术领域。

背景技术

大豆是一种含有丰富优质蛋白的豆科植物，具有较高的营养价值，是人类日常饮食中蛋白质的重要来源之一。受传统的饮食习惯影响，大豆油也是人们日常生活必需品。国内普通大豆供不应求，因此需要从海外进口大量的转基因大豆来满足市场需求，我国也因此成为全球转基因进口量和压榨量最大的国家。

转基因大豆是通过基因工程技术将外源基因(人工分离或进行修饰后的基因)与普通大豆的基因组DNA进行重组并表达，从而对大豆的表达性状进行改造。因其高产、耐除草剂和抗病虫害等特点被广泛种植。抗草甘膦转基因大豆是目前全球种植面积最大的大豆品种。草甘膦是一种高效、广谱、易降解的有机除草剂。虽对哺乳动物的毒性相对较低，但随着使用量的增加，草甘膦暴露出对雄性哺乳动物有显著的生殖毒性，主要通过雄性生殖激素的分泌和代谢水平，从而干扰和破坏生殖细胞和生殖器官的形成，导致精子数量减少和质量降低，造成不孕不育。草甘膦的主要代谢物氨甲基膦酸则会干扰DNA正常复制，染色体异常，增加人们的患癌几率。“美国草甘膦致癌”、“许昌草甘膦泄露”等事件的发生，引发了人们抗草甘膦转基因大豆中草甘膦及其主要代谢物氨甲基膦酸的残留问题的高度关注。

目前，检测草甘膦的方法主要有分光光度法、气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、离子色谱法、毛细管电泳法等。分光光度法虽然操作简单，但灵敏度不高，易受其他离子干扰。离子色谱法只适用于水样等简单基质。气相色谱法和气相色谱-质谱联用法要将目标物转为可气化物质，需使用较多试剂，过程复杂，耗时过长。使用液相色谱法和液相色谱-质谱联用法时，若直接提取后上机检测，受基质干扰影响较大，灵敏度不高。柱前衍生-液质联用法是近几年来检测草甘膦和氨甲基膦酸的常用方法，国内外已有较多关于柱前衍生-液质联用法检测草甘膦的报道，且主要针对于水、土壤、茶叶、稻米等基质，针对转基因大豆的研究报道相对较少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，而提供一种检测转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的方法，本发明建立了一种利用柱前衍生-UPLC-MS/MS-内标法测定转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的检测方法；采用UPLC-MS/MS，在电喷雾电离(ESI⁺)和多反应监测模式下测定，用同位素内标法进行定量分析，实现对转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸的快速分离和准确定性定量。本方法灵敏度高、回收率好、定性能力强、分辨率高，且前处理过程操作简单，能满足在线自动化检测的要求，从而达到绿色、高效、准确定性定量分析的目的。本方法操作简单、耗时较短、提取率好，更有效降低复杂基质成分的干扰、检出限低，适用于转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的日常检测工作。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测转基因大豆中草甘膦和氨甲基膦酸残留的方法，包括以下步骤：

(1)配置标准品：

移取草甘膦和氨甲基膦酸混合标准溶液于容量瓶中用纯水定容后得到混合标准储备液，然后利用纯水逐级稀释混合标准储备液，得到浓度逐级变化的混合标准溶液系列；

(2)样品提取、净化和衍生：