[发明专利]一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法

权利要求书

1.一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，取0.5ml-1ml临床生物样本，将临床生物样本加入装有混合磁珠的试管中，混合均匀后静置12min-15min，将试管置于磁力架上并静置3min-5min后，送入离心机中进行离心处理，在12000rmp的条件下离心3.5min，吸弃上清液；

S2，向试管中加入1.5ml生理盐水，在旋涡振荡器内振荡打散沉淀，送入离心机中进行离心处理，在12000rmp的条件下离心6min-9min，吸弃上清液，使用移液枪向试管中加入85ul-90ul第一处理液，等待试管内溶液变得清亮后再加入15ul-20ul的醋酸钾缓冲液，混合均匀，等待试管内出现白色絮状沉淀后，再次送入离心机中进行离心处理，在12000rmp的条件下离心6.5min-8.5min，吸弃上清液，并向试管中加入洗涤液，混合均匀后，置于磁力架上放置5.5min-6min，收集洗脱液，即得临床生物样本核酸溶液；

S3，将临床生物样本核酸溶液送入装有提取液的收集管中，混合均匀后，将吸附膜浸渍于提取溶液，静置15min-20min，将吸附膜取出，使用洗脱液缓慢清洗吸附膜，再将吸附膜置于PCR反应液，调节PCR反应液的pH为8.4，吸附膜向PCR反应液中释放核酸。

2.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S1中混合磁珠由免疫磁珠和核酸提取磁珠混合制成，免疫磁珠为病毒抗体或受体等通过与磁性微球表面的羟基、羧基、氨基或环氧基键合得到的MNP-Ab，核酸提取磁珠为硅羟基磁珠、羧基磁珠或其他可在特定条件下结合病毒核酸的磁珠，病毒抗体包括囊膜病毒的外膜蛋白、不带囊膜病毒的外壳蛋白抗体或核衣壳蛋白抗体，囊膜病毒的外膜蛋白抗体为F蛋白、M蛋白、N蛋白或S蛋白的抗体，病毒受体为与病毒特异性结合的单体或多分子复合物。

3.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S2中使用移液枪加入第一处理液时，需要用移液枪温柔吹散试管内的沉淀细胞，并盖紧管盖缓慢地震荡试管，不要剧烈震荡。

4.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S2中第一处理液由Chelex-100、MNaOH、SDS以及生理盐水混合制成，Chelex-100的浓度为11.5％-12％，NaOH的浓度为0.45M-0.48M，SDS的浓度为5.5％-5.8％，第一处理液的pH为13.5-13.9。

5.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S2中醋酸钾缓冲液的pH为5.8-5.9。

6.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S2中混合均匀的具体操作步骤为：盖紧管口，将试管颠倒数次混匀并用手指轻轻弹试管底数次。

7.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S3中提取液由异硫氰酸胍、TritonX100、Tween-20、蛋白酶K、MNaCl、MEDTA、Tween-20以及SDS混合制成，异硫氰酸胍的浓度为2.2M-2.3M，TritonX100的浓度为0.52wt％，Tween-20的浓度为1.3wt％，蛋白酶K的浓度为61μg/mL，MNaCl的浓度为151M，MEDTA的浓度为12M，SDS的浓度为0.55％，提取液的pH值为8.1。

8.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S3中吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜。

9.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S3中的洗脱液为0.12wt％Tween-20的Tris缓冲液，洗脱液的pH值为8.2。

10.根据权利要求1所述的一种用于临床样本检测的快速提取核酸方法，其特征在于：所述S2中洗涤液由5.5M盐酸胍、56％无水乙醇以及80μg/mL蛋白酶K的混合制成，pH值为6-7。