[发明专利]一种基于KASP技术用于水稻耐高温基因分型的引物组、检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于KASP技术用于水稻耐高温基因分型的引物组，其特征在于，包括扩增OsTT1的引物组、扩增SLG1的引物组和扩增SUS3的引物组；

所述扩增OsTT1的引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的第一正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的第二正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物；

所述扩增SLG1的引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的第一正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的第二正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示的反向引物；

所述扩增SUS3的引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的第一正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示的第二正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示的反向引物；

第一正向引物和第二正向引物采用不同标记物修饰。

2.根据权利要求1所述引物组，其特征在于，所述标记物包括荧光基团或标签序列。

3.根据权利要求2所述引物组，其特征在于，3条第一正向引物分别采用FAM标签序列修饰，3条第二正向引物分别采用HEX标签序列修饰；

所述FAM标签序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；

所述HEX标签序列如SEQ ID NO:11所示。

4.一种用于水稻耐高温基因分型的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3一项所述引物组。

5.根据权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括2×KASPMasterMix。

6.权利要求1～3任意一项所述引物组或权利要求4或5所述检测试剂盒在水稻耐高温基因分型中的应用。

7.权利要求1～3任意一项所述引物组或权利要求4或5所述检测试剂盒在耐高温水稻辅助育种中的应用。

8.一种水稻资源的耐高温基因型的分型方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待检测水稻资源的基因组DNA；

2)以步骤1)中提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1～3任意一项所述引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

3)将步骤2)中所述PCR扩增产物进行标记物检测，获得3个片段对应的基因型。

9.根据权利要求8所述分型方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为5μl：模板DNA2.43μl，引物混合液0.07μl，2×KASP MasterMix 2.5μl，每条第一正向引物或每条第二正向引物的终浓度为12μM，每条反向引物的终浓度为25μM。

10.根据权利要求8或9所述分型方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94℃15min；94℃20s，61℃～55℃梯度退火并延伸60s，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；94℃20s，55℃60s，32个循环。