[发明专利]一种高生育酚含量微藻的培育方法和筛选方法

说明书

本发明公开了一种高生育酚含量微藻的培育方法和筛选方法，涉及藻类培育领域。培育方法包括：将微藻置于培养基中避光培养，微藻为浐灞湿地公园的人工湖生长的栅藻或新疆博斯腾湖生长的小球藻。筛选方法包括：在不同水域进行水样采集、分离纯化；检测生育酚合成途径中的关键基因表达量；测定初筛后样品的生物量和油脂含量，随后再对油脂含量高的微藻进行生育酚含量测定；进行18S rRNA基因扩增及序列分析鉴定。本申请筛选获得的高生育酚含量藻株经过培育后，可以获得高产量的生育酚，提高维生素E的产量。

技术领域

本发明涉及领域，尤其涉及一种高生育酚含量微藻的培育方法和筛选方法。

背景技术

维生素E(生育酚)是光合作用细胞合成的脂溶性抗氧化剂，鉴于维生素E的多种生理作用，已被广泛应用于食品添加剂、防腐剂、化妆品(如防晒剂)的生产中，也被用作饲料添加剂。目前维生素E制备方法主要有化学合成、生物提取和生物合成。其中化学合成和生物提取法收率低，易污染环境，生物合成法操作复杂。

目前，利用微生物产维生素E以其绿色环保的特点成为新的研究方向，其中微藻是天然生育酚很好的来源，迄今为止发现能合成生育酚的微藻主要有螺旋藻(Spirulinaplatensis)、杜氏藻(Dunaliellatertiolecta)、集胞藻(Synechocystisaquatilis)、微绿球藻(Nannochloropsisoculata)、心形扁藻(Tetraselmissuecica)、衣藻(Chlamydomonas)、棕鞭藻(Ochromonas)、裸藻(Euglena gracilis)和等鞭金藻(Isochrysisgalbana)。不同种类的微藻其细胞内生育酚含量与比例依微藻种类、组织和培养条件的不同而不同。目前对于微藻中的维生素E相关研究较缺乏，导致利用微藻来生产生育酚的产业发展受限，急需寻求含油量高且生育酚含量高的藻种，并探索其合适的生长条件。

发明内容

本发明提供了一种高生育酚含量微藻的培育方法和筛选方法，以获得一种高生育酚含量的微藻，有利于促进生育酚生产产业的发展。

为了解决上述技术问题，本发明目的之一提供了一种高生育酚含量微藻的培育方法，包括以下步骤：将微藻置于培养基中，避光培养，其中微藻为浐灞湿地公园的人工湖生长的栅藻或新疆博斯腾湖生长的小球藻。

作为优选方案，所述培养基为BG-11培养基，所述BG-11培养基中Na₂CO₃的添加量为0，所述BG-11培养基还包括有碳源，所述碳源为葡萄糖、工业甘油和工业苹果酸中的一种或多种。

作为优选方案，所述碳源由葡萄糖和工业苹果酸按质量比为1：1混合而成。

作为优选方案，所述碳源的浓度为20g/L。

作为优选方案，避光培养条件为在温度27℃、转速120r/min的摇床中培养。

为了解决上述技术问题，本发明目的之二提供了一种高生育酚含量微藻的筛选方法，包括以下步骤：

S1、在不同水域进行水样采集，随后进行藻株的分离纯化；

S2、检测水样中的生育酚含量，进行高生育酚含量藻株的初筛；

S3、测定初筛后样品的生物量和油脂含量，随后再对油脂含量高的微藻进行生育酚含量测定，进行高生育酚含量藻株的复筛；

S4、对复筛后获得的藻株进行18S rRNA基因扩增及序列分析鉴定。

作为优选方案，在步骤S2和S3中，生育酚含量采用实时荧光定量PCR检测生育酚合成途径中的关键基因表达量。

作为优选方案，生育酚合成途径中的关键基因包括HPPD、GGH、MPBQMT、TC和γ-TMT中的一种或多种。