[发明专利]用于鉴别马哇椰子的InDel标记及其应用

权利要求书

1.用于鉴别马哇椰子的InDel标记的引物对，其特征在于，所述InDel标记的引物对为如SEQ ID No.1-2所述引物对、如SEQ ID No.3-4所述引物对、或者如SEQ ID No.5-6所述引物对。

2.一种用于鉴别马哇椰子的InDel标记引物组，其特征在于，所述InDel标记引物组由以下引物对中的两种或两种以上组成：如SEQ ID No.1-2所述引物对、如SEQ ID No.3-4所述引物对、如SEQ ID No.5-6所述引物对。

3.一种用于鉴别马哇椰子的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1所述的InDel标记引物对、或者权利要求2所述的InDel标记引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其还包括进行PCR反应和/或电泳所需的试剂。

5.权利要求1所述的InDel标记的引物对或者权利要求2所述的InDel标记引物组或者权利要求3或4所述的试剂盒在鉴别马哇椰子中的应用。

6.一种鉴别马哇椰子的方法，其特征在于，采用权利要求1述的InDel标记的引物对或者权利要求2所述的InDel标记引物组或者权利要求3或4所述的试剂盒进行。

7.根据权利要求6所述的方法，包括以下步骤：

（1）提取各品种椰子叶片DNA；

（2）采用InDel标记引物对或InDel标记引物组或试剂盒对椰子叶片DNA进行PCR扩增；

（3）对扩增结果进行凝胶电泳检测；

（4）根据检测结果对不同品种椰子进行鉴别，凝胶电泳结果显示两条带的为马哇椰子，一条带的为其他品种椰子。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，凝胶电泳结果有两条电泳条带的，且存在电泳结果大于或小于目的条带的是马哇椰子，而电泳结果显示只有一条条带的或与目的条带目的片段大小一致的是其他品种椰子，其中：当所述InDel标记引物对为如SEQ ID No.1-2所示引物对时，目的条带或目的片段为109bp；当所述InDel标记引物对为如SEQ ID No.3-4所示引物对时，目的条带或目的片段为140bp；当所述InDel标记引物对为如SEQ ID No.5-6所示引物对时，目的条带或目的片段为141bp。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取马哇椰子叶片DNA；

（2）采用InDel标记引物对或InDel标记引物组或试剂盒对马哇椰子叶片DNA进行PCR扩增；

（3）对PCR产物进行聚丙烯酰胺胶电泳检测，并用胶回收试剂盒对电泳结果中两条电泳条带分别进行回收；

（4）回收产物进行PCR扩增后将PCR产物进行纯化，连接转化后挑单克隆测序；

（5）根据测序结果以高种椰子基因组为参照对马哇椰子测序序列进行Blast比对，存在插入片段的是马哇椰子。