[发明专利]分子逻辑门智能化检测真菌毒素新方法

权利要求书

1.一种真菌毒素检测试剂，其特征在于，所述试剂中含有发夹探针组；

所述发夹探针组包括发夹探针A、发夹探针B、发夹探针C、发夹探针D、发夹探针E、发夹探针F、发夹探针G和发夹探针H中的至少一种；

所述发夹探针A～H的核苷酸序列为：

发夹探针A：5'-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAGCTCCCTTTACAAAAAAAAAAA-3'(SEQ ID NO.1)；

发夹探针B：5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAGCTCCCTTTACAAAAAAAAAAATGCCCAAC-3'(SEQ ID NO.2)；

发夹探针C：5'-TCATCTATCTATGGTACATTACTATCTGTAATGTGATATGTTTTTTTTTTGCCACCCACACATAGATG-3'(SEQ ID NO.3)；

发夹探针D：5'-GGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCCCATGTATCGAGCTCCCTTTACGCCTGTGT-3'(SEQ ID NO.4)；

发夹探针E：5'-TGTGTGTGTGTAAGGGAGCTCGATACATGGGCTCCCTTTACGCCCCATGTATCGA-3'(SEQ ID NO.5)；

发夹探针F：5'-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAGCTCCCTTTACGCCACCCACAC-3'(SEQ ID NO.6)；

发夹探针G：5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACAGCTCCCTTTACGCCACCCACACTGCCCAAC-3'(SEQ ID NO.7)；

发夹探针H：5'-TCATCTATCTATGGTACATTACTATCTGTAATGTGATATGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATTACAGAT-3'(SEQ ID NO.8)。

2.根据权利要求1所述的真菌毒素检测试剂，其特征在于，所述真菌毒素包括黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮毒素。

3.一种真菌毒素检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1或2所述的真菌毒素检测试剂、酶链和底物链。

4.根据权利要求3所述的真菌毒素检测试剂盒，其特征在于，所述酶链的核苷酸序列为：酶链DNA1：5'-ACACAGGCGTAGACTCCGAGCCGGACGAAGTTACCCACACCCC-'3(SEQ ID NO.9)。

5.根据权利要求3所述的真菌毒素检测试剂盒，其特征在于，所述底物链的核苷酸序列为：底物链DNA2：5'-TCGATACATGGAACTrAGGTCACACACACACA-'3(SEQ ID NO.10)；其中，rA代表核酸A修饰。

6.根据权利要求5所述的真菌毒素检测试剂盒，其特征在于，所述底物链上修饰有荧光基团和猝灭基团，所述荧光基团和猝灭基团分别修饰于酶切位点的对立两侧。

7.根据权利要求1～2任一项所述的真菌毒素检测试剂或权利要求3～6任一项所述的真菌毒素检测试剂盒在食品安全检测中的应用。

8.一种真菌毒素的检测方法，包括如下步骤：

(1)将权利要求1中的发夹探针组加热至92～95℃，然后冷却至室温，使其形成发夹结构；

(2)将检测样品、形成发夹结构的发夹探针组、权利要求4中的酶链和权利要求5中的底物链在25±2℃条件下孵育90～95min，检测荧光信号。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测样品为食品。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法执行“OR-AND”和/或“OR-INHIBIT”分子逻辑门；

所述“OR-AND”分子逻辑门的检测体系为：

组分	终含量
检测样品	10μL
发夹探针A	200～300nM
发夹探针B	200～300nM
发夹探针C	200～300nM
发夹探针D	200～300nM
发夹探针E	400～600nM
酶链DNA1	200～300nM
底物链DNA2	200～300nM
氯化镁	10mM
2O]]>	补至100μL

所述“OR-INHIBIT”分子逻辑门的检测体系为：