[发明专利]特异性结合β-银环蛇毒素的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了特异性结合β‑银环蛇毒素的抗体或其活性片段、检测β‑银环蛇毒素的试剂盒及其应用。本发明的检测方法简便、快速，无需特殊仪器设备即可检测，实用经济，极适用于快速定性检测样本中的β‑BGT。这在蛇毒抗原的检测、蛇咬伤中毒的预防及救治等方面具有重要意义。

技术领域

本发明涉及基因工程免疫技术领域，具体的涉及β银环蛇神经毒素单克隆抗体的制备，以及编码所述抗体的核酸。还涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测β-银环蛇毒素检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

银环蛇(Bungarus multicinctus)是眼镜蛇科环蛇属的一种动物，是分布于中国、缅甸、老挝、越南北部和泰国等地区最毒的蛇。全身背面是黑白相间的环纹，具30～50个白色或乳黄色窄横纹。银环蛇一次可排毒4.6mg，而1mg的干毒即可致命。银环蛇毒素(Bungarotoxin)的主要成分为蛋白质和多肽，包括α-银环蛇毒素(α-BGT)、β-银环蛇毒素(β-BGT)、κ-银环蛇毒素(κ-BGT)、γ-银环蛇毒素(γ-BGT)和磷脂酶A等酶类。其中，主要用于医学药理学和分子免疫学，制备单克隆抗体的是β-银环蛇毒素。β-银环蛇毒素是一种高碱性多肽，其分子量为20～22KD，由A、B两条链构成。A链具有磷脂酶A₂的活性，在结构上与哺乳动物胰腺分泌的磷脂酶A₂及其它蛇毒液中的磷脂酶A₂具有同源性。B链是β-BGT对特定靶向细胞膜的识别亚基，在神经-肌肉接头突触前膜中的一些成分间相互作用上有着重要的功能。

β-银环蛇毒素的毒性强，致命性强。因此，亟需建立一种快速便捷、灵敏度高及特异性好的检测β-银环蛇毒素的方法，为β-银环蛇毒素中毒的治疗以及紧急预防奠定基础。

发明内容

本发明的第一个目的是提供特异性结合β-银环蛇毒素的抗体及其活性片段。

具体而言，本发明提供的抗体或活性片段包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区，其中：

所述重链可变区具有SEQ ID NO:3所示的CDR1，SEQ ID NO:4所示的CDR2和/或SEQID NO:5所示的CDR3；或者，所述重链可变区具有SEQ ID NO:13所示的CDR1，SEQ ID NO:14所示的CDR2和/或SEQ ID NO:15所示的CDR3；

所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8所示的CDR1，SEQ ID NO:9所示的CDR2和/或SEQID NO:10所示的CDR3；或者，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:18所示的CDR1，SEQ ID NO:19所示的CDR2和/或SEQ ID NO:20所示的CDR3。

作为本发明的一种优选方案，所述抗体中，所述重链可变区具有SEQ ID NO:3所示的CDR1，SEQ ID NO:4所示的CDR2和/或SEQ ID NO:5所示的CDR3；所述轻链可变区具有SEQID NO:8所示的CDR1，SEQ ID NO:9所示的CDR2和/或SEQ ID NO:10所示的CDR3。

作为本发明的一种优选方案，所述抗体中，所述重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或SEQID NO:6所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。

作为本发明的一种优选方案，所述抗体中，所述重链可变区具有SEQ ID NO:13所示的CDR1，SEQ ID NO:14所示的CDR2和/或SEQ ID NO:15所示的CDR3；所述轻链可变区具有SEQ ID NO:18所示的CDR1，SEQ ID NO:19所示的CDR2和/或SEQ ID NO:20所示的CDR3。