[发明专利]一种基于多聚赖氨酸大分子（DGL）结构的酶标二抗制备及其方法

权利要求书

1.一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、目标分子骨架的选择：选取多聚赖氨酸大分子DGL(D1-D3)；

S2、目标结合酶的选择：选择辣根过氧化氢酶(HRP)；

S3、目标结合IgG抗体的选择：选择山羊抗兔免疫球蛋白IgG作为目标抗体；

S4、检测系统(SD-PolyHRP)：多聚赖氨酸大分子(DGL)上的-NH₂官能团与辣根过氧化物酶(HRP)、IgG上-COOH官能团进行酰胺化反映，使蛋白分子紧密结合在多聚赖氨酸大分子(DGL)骨架结构上，增加单位体积蛋白的浓度；

S5、试验过程：

S51、选用辣根过氧化物酶HRP 3.5g溶解到8ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，添加二苯基亚砜溶液0.4ml于10℃低温低速搅拌1.5h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩至5ml试管中，2-8℃冷藏备用；

S52、取0.4g的多聚赖氨酸大分子(DGL)溶于6ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，将该溶液和步骤S51液体进行混合，于10℃低温下孵育反应20h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩，取其浓缩液装于5ml试管中，2-8℃冷藏备用；

S53、把0.4g特异性含有Fab段肽链的羊抗兔IgG分子溶解到1L、PH＝7.4的PBS溶液中，充分搅拌均匀后加入5ml BMPS溶液，低速磁力搅拌均匀下，加入步骤S52的5ml浓缩液，搅拌5min后孵育16h，再加入抗原封闭剂牛血清白蛋白1g，充分搅拌均匀，合成的“HRP－DGL—IgG”聚合物存储于2-8℃备用。

2.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S1中选取的多聚赖氨酸大分子为D3代大分子，其分子式为：C₁₀₃H₁₉₃N₃₁O₁₅·16HCL，分子量为：2688，其表面拥有高密度的活性氨基高分子团。

3.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S2中的辣根过氧化氢酶，其RZ值＞3.0，活性＞300u/mg，CAS编号9003-99-0，其中同工酶C含量大于99.99％。

4.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S3中的山羊抗兔免疫球蛋白IgG的产品编号为AP132，山羊抗兔免疫球蛋白IgG分子量为160000左右，分子量比较大，可以通过采用木瓜蛋白酶的酶化学反应去除抗体上无抗原识别能力但是容易引起非特异性吸附的Fc段肽链，保留具有抗体识别能力的Fab段肽链，这样的小分子IgG可以更好的穿透细胞，提高细胞核的染色灵敏度。