[发明专利]CRISPR相关转座酶系统和其使用方法

权利要求书

1.一种用于插入供体多核苷酸的工程化核酸靶向系统，所述系统包含：

a.一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白或其功能片段；

b.Cas蛋白；和

c.能够与所述Cas蛋白复合并引导指导物-Cas蛋白复合物与靶多核苷酸的靶序列的序列特异性结合的指导分子。

2.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白包含i)TnsB和TnsC，或ii)TniA和TniB。

3.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白包含：

a.TnsA、TnsB、TnsC和TniQ，

b.TnsA、TnsB和TnsC，

c.TnsB、TnsC和TniQ，

d.TnsA、TnsB和TniQ，

e.TnsE，

f.TniA、TniB和TniQ，

g.TnsB、TnsC和TnsD，或

h.它们的任何组合。

4.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白包含TnsB、TnsC和TniQ。

5.如权利要求4所述的系统，其中所述TnsB、TnsC和TniQ由表27或表28中的多核苷酸编码，或者是表29或表30中的蛋白质。

6.如权利要求3所述的系统，其中所述TnsE不与DNA结合。

7.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白是一种或多种Tn5转座酶。

8.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白是一种或多种Tn7转座酶或Tn7样转座酶。

9.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白包含TnpA。

10.如权利要求1所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR相关转座酶蛋白包含TnpAI_S608。

11.如权利要求1所述的系统，所述系统还包含用于插入所述靶多核苷酸中的供体多核苷酸。

12.如权利要求11所述的系统，其中所述供体多核苷酸是线性的。

13.如权利要求11所述的系统，其中所述供体多核苷酸在5'端切刻。

14.如权利要求11所述的系统，其中所述供体多核苷酸将被插入在所述靶多核苷酸中PAM序列下游40至100个碱基之间的位置。

15.如权利要求11所述的系统，其中所述供体多核苷酸的侧翼是右端序列元件和左端序列元件。

16.如权利要求11所述的系统，其中所述供体多核苷酸：

a.向所述靶多核苷酸引入一个或多个突变，

b.在所述靶多核苷酸中引入或校正提前终止密码子，

c.破坏剪接位点，

d.恢复或引入剪接位点，

e.在靶多核苷酸的一个或两个等位基因处插入基因或基因片段，或

f.它们的组合。

17.如权利要求14所述的系统，其中由所述供体多核苷酸引入的所述一个或多个突变包括取代、缺失、插入或它们的组合。

18.如权利要求15所述的系统，其中所述一个或多个突变导致所述靶多核苷酸上的开放阅读框的移位。