[发明专利]流式细胞仪

说明书

本流式细胞仪包括：流路，观察对象与流体一起在该流路中流动；光学照明系统，包括空间光学调制装置和第一光学元件；以及光学检测系统，包括第一光检测器，其中光学照明系统还包括第一空间滤光片，第一空间滤光片布置在光源和在流路中通过第一光学元件成像的光的图像位置之间的第一光路中，并且具有阻碍从光源发出的光朝向观察对象传播的第一区域，光学检测系统还包括第二空间滤光片，该第二空间滤光片布置在第一光检测器和图像位置之间的第二光路中并且具有指引由观察对象所调制的光朝向第一光检测器的第二区域，且第一区域的位置和第二区域的位置处于基本上光学共轭的关系。

技术领域

本发明涉及流式细胞仪。

本申请要求2020年4月1日提交的日本专利申请第2020-065940号的优先权，其内容通过引用并入本文。

背景技术

近年来，面向实际使用新的治疗方法例如使用干细胞(例如诱导性多能干细胞(iPS))的再生医学和使用嵌合抗原受体T细胞的免疫疗法等的行动已经很活跃，对包含在细胞群中的各个细胞进行逐个细胞分析的需求很强烈。

作为利用一个细胞(单细胞)进行这种分析的情况下的细胞测定技术，已经提出了流式细胞测定方法。流式细胞测定方法是用于将各个细胞分散在流体中、允许流体微细地向下流动并执行光学分析的技术，使用该技术的装置被称为流式细胞仪(专利文献1)。在流式细胞测定方法中，可以通过在待观察的细胞等微粒在流路中高速向下流动的同时照射激发光，并获得从每个细胞发出的荧光亮度或散射光的总量来评价观察对象。

然而，在基于有限的信息例如荧光亮度或散射光的总量的测量方法中，难以捕捉和评价观察对象的二维空间特征，例如细胞形态信息和细胞内分子定位。作为能够获取可更详细地描述细胞形态的高分辨率信息的流式细胞测定方法，已经提出了一种将结构化照明(结构化的(编码的)照明)照射到细胞等观察对象以检测从观察对象发出的具有光学特性的荧光或其他调制信号。与获得荧光亮度和散射光的总量的传统流式细胞术相比，通过使用该方法可以获得更丰富和更详细的细胞形态信息。作为这种方法的一个示例，例如，已知鬼影细胞测定技术(专利文献2)。

众所周知，在调制信号中，特别是从被光照射过的细胞发出的散射光与细胞形状和内部结构等形态信息相关，并且根据散射光被散射的方向可以获得一条形态信息。因此，同样在流式细胞术中，已知一种利用荧光和散射光的组合来测量细胞并且基于测量结果识别和分拣样品中包含的所需细胞的方法(专利文献3)。

引用列表

专利文献

专利文献1：日本特开2011-99848号公报

专利文献2：国际公开第WO2017/073737号

专利文献3：日本特开2016-73210号公报

发明内容

技术问题

本发明是鉴于上述几点而做出的并且提供了一种用于使用比在过去在流式细胞术中使用的结构化照明更简单的机制来检测由观察对象例如散射光调制的光的方法。在使用如上所述的结构化照明的流式细胞术中，由于需要用结构化照明来照射观察对象，因此难以在避免入射到检测器的直射光或反射光的同时检测在每个方向上散射的散射光。因此，迄今为止，还没有提出通过在使用结构化照明的流式细胞术中的简单机制来实现信噪比足够高的散射光检测方法。

问题的解决方案