[发明专利]表达BCMA特异性嵌合抗原受体的基因工程化T细胞及其在癌症疗法中的用途

权利要求书

1.一种治疗多发性骨髓瘤(MM)的方法，该方法包括：

(i)向有需要的受试者施用有效量的一种或多种淋巴细胞清除化疗剂；以及

(ii)在步骤(i)之后向该受试者施用有效量的基因工程化T细胞群体；

其中该基因工程化T细胞群体包含含有核酸、被破坏的TRAC基因、和被破坏的β2M基因的T细胞，该核酸包含编码结合BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列；并且其中该编码CAR的核酸被插入该被破坏的TRAC基因中。

2.如权利要求1所述的方法，其中该结合BCMA的CAR包含：

(i)包含抗BCMA单链可变片段(scFv)的胞外结构域；

(ii)CD8a跨膜结构域；以及

(iii)包含来自4-1BB的共刺激结构域和CD3ζ信号传导结构域的胞内结构域。

3.如权利要求2所述的方法，其中该抗BCMA scFv包含含有SEQ ID NO:42的重链可变结构域(V_H)和含有SEQ ID NO:43的轻链可变结构域(V_L)。

4.如权利要求3所述的方法，其中该抗BCMA scFv包含SEQ ID NO:41。

5.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中该结合BCMA的CAR包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。

6.如权利要求5所述的方法，其中该编码抗BCMA CAR的核酸包含SEQ ID NO:33的核苷酸序列。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该被破坏的TRAC基因通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统包括含有SEQ ID NO:4的间隔子序列的指导RNA。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该被破坏的TRAC基因具有包含SEQ IDNO:10的缺失，任选地其中该被破坏的TRAC基因包含取代该缺失的SEQ ID NO:30的核苷酸序列。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中该被破坏的β2M基因通过CRISPR/Cas9基因编辑系统产生，该基因编辑系统包括含有SEQ ID NO:8的间隔子序列的指导RNA。

10.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中该被破坏的β2M基因包含SEQ ID NO:21-26中的至少一个。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在该基因工程化T细胞群体中，这些基因工程化T细胞中≥30％是CAR⁺，这些基因工程化T细胞中≤0.4％是TCR⁺，并且/或者这些基因工程化T细胞中≤30％是B2M⁺。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中该基因工程化T细胞群体衍生自一个或多个健康人类供体。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中该基因工程化T细胞群悬浮于冷冻保存溶液中。