[发明专利]GLB1重组报告基因、分离的构建体以及制备转基因报告小鼠的方法

权利要求书

1.一种Glb1重组报告基因，包括：在Glb1基因的终止密码子位点从5’至3’端方向顺序地插入的2A序列以及报告基因；其中，所述Glb1基因与所述报告基因一起转录成单个mRNA，使得所述Glb1基因的转录水平与所述报告基因的转录水平显著相关，所述报告基因为mCherry，所述Glb1重组报告基因用于在活体动物内通过体内成像技术监测所述Glb1重组报告基因的蛋白水平来监测系统性衰老和功能衰退，其中，所述Glb1重组报告基因的蛋白水平通过mCherry荧光信号实现可视化监测。

2.如权利要求1所述的Glb1重组报告基因，其中，所述Glb1重组报告基因具有由SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的Glb1重组报告基因，其中，所述Glb1基因为小鼠Glb1基因，且具有由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

4.一种分离的构建体，其中，所述构建体用于靶向Glb1基因的终止密码子位点，所述构建体从5’至3’端方向依次包括：2A序列和报告基因，所述报告基因为mCherry，所述构建体能够将2A序列和报告基因精确插入Glb1基因的预先设计的靶向位点，从而生成Glb1重组报告基因，所述Glb1重组报告基因用于在活体动物内通过体内成像技术监测所述Glb1重组报告基因的蛋白水平来监测系统性衰老和功能衰退，其中，所述Glb1重组报告基因的蛋白水平通过mCherry荧光信号实现可视化监测。

5.如权利要求4所述的构建体，进一步包括：位于所述2A序列的5’端的5’端同源臂，以及位于mCherry序列的3’端的3’端同源臂。

6.如权利要求4所述的构建体，其中，所述构建体包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

7.如权利要求4所述的构建体，其中，所述Glb1基因为小鼠的Glb1基因，且具有由SEQID NO.2所示的核苷酸序列。

8.一种制备转基因报告小鼠的方法，所述方法包括：

将权利要求4所述的构建体引入小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞，获得包括Glb1重组报告基因的所述小鼠胚胎干细胞或者所述小鼠生殖细胞；并且

利用包括所述Glb1重组报告基因的所述小鼠胚胎干细胞或者所述小鼠生殖细胞生成杂合子的转基因报告小鼠；

其中，所述Glb1重组报告基因具有由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述转基因报告小鼠的月龄为9-13个月。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述转基因报告小鼠用于：通过体内成像技术监测所述Glb1重组报告基因的蛋白水平来监测系统性衰老和功能衰退、研究衰老机制或者筛选抗衰老药物制剂。

11.一种抗衰老药物的筛选方法，所述方法包括：

提供包括权利要求1所述的Glb1重组报告基因的转基因报告小鼠或者根据权利要求8所述的方法制备的转基因报告小鼠；

将候选药物施用于所述转基因报告小鼠；

通过体内成像技术对所述转基因报告小鼠体内的所述Glb1重组报告基因的蛋白水平进行监测；并且

如果候选药物选择性地杀死了具有Glb1重组报告基因的高蛋白水平的细胞，则选择所述候选药物作为抗衰老药物，其中，所述Glb1重组报告基因的所述高蛋白水平采用85％置信区间定义；

其中，所述转基因报告小鼠是9-13个月龄的杂合子的转基因报告小鼠。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述Glb1重组报告基因的蛋白水平通过mCherry荧光信号实现可视化监测。

13.如权利要求12所述的方法，其中，所述抗衰老药物包括用于治疗心血管疾病、阿尔茨海默氏病、骨质疏松和肺纤维化的药物。