[发明专利]一种UDG酶的酶活测定组合物及测定方法

权利要求书

1.一种UDG酶的酶活测定组合物，其特征在于：包括去RNA酶水、UDGA探针、UDG酶标准品、UDG酶测活缓冲液和Endo VIII酶，所述UDGA探针为发夹型结构，两端分别连接发光基团和猝灭基团，直链部分包含U碱基。

2.根据权利要求1所述的一种UDG酶的酶活测定组合物，其特征在于：所述UDG酶测活缓冲液的配方包括：去RNA酶水、20mM Tris8.0、10mM NaCl、1mM DTT、0.1mM EDTA、0.05％CA630、0.05％Tween 20、2％Glycerol和0.1mg/ml BSA。

3.根据权利要求2所述的一种UDG酶的酶活测定组合物，其特征在于：

当UDG酶标准品过量时，所述UDGA探针反应体系按体积比例为：UDG酶标准品1份、EndoVIII酶0.25份、10倍的UDG酶测活缓冲液2.3份、去RNA酶水19.45份、UDGA探针2份；

当UDGA探针过量时，所述UDG酶反应体系按体积比例为：UDGA探针1份、10倍的UDG酶测活缓冲液2.3份、Endo VIII酶0.25份、去RNA酶水19.45份、待测的UDG酶2份。

4.根据权利要求3所述的一种UDG酶的酶活测定组合物，其特征在于：所述UDGA探针的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述碱基序列中的ATCAUC和GATGAT是相互配对的双联部分，其余为环状部分。

5.根据权利要求4所述的一种UDG酶的酶活测定组合物测定UDG酶酶活的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以UDGA探针不同浓度梯度为横坐标，根据所述UDGA探针反应体系，以反应速率稳定后的某一时间的信号值与起始信号值的差值ΔRn建立标准曲线，

(2)稀释不同梯度的UDG酶标准品，根据所述UDG酶反应体系，获得与所述步骤(1)的ΔRn范围相对应的稀释倍数N范围；

(3)在同一反应过程中，

以UDGA探针不同浓度梯度为横坐标，根据所述UDGA探针反应体系，以反应速率稳定后的某一时间的信号值与起始信号值的差值ΔRn建立标准曲线，获得标准曲线的K值；

将待测酶稀释到步骤(2)获得的稀释倍数N，根据所述UDG酶反应体系，获得稀释后的待测酶的ΔRn；

待测酶的酶活＝待测酶的ΔRn÷K*N；

式中，K为标准曲线的斜率，N为待测酶的稀释倍数。

6.根据权利要求5所述的一种测定UDG酶的方法，其特征在于，所述反应速率稳定后的某一时间为30分钟。

7.根据权利要求5所述的一种测定UDG酶的方法，其特征在于，所述反应条件为37℃，30s，反应30min

8.根据权利要求5所述的一种测定UDG酶的方法，其特征在于，当所述UDGA探针反应对应的酶活单位为mU时，所述待测酶的酶活U/ul＝待测酶的ΔRn÷K÷C*N；

式中，C为mU与U的换算系数1000。