[发明专利]磁珠包被物及其制备方法和检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种磁珠包被物及其制备方法和检测试剂盒。该磁珠包被物的制备方法包括以下步骤：采用多胺修饰牛血清白蛋白制备阳离子牛血清白蛋白，及将纳米磁珠与活性物质通过阳离子牛血清白蛋白偶联制备磁珠包被物。采用上述磁珠包被物的制备方法制备磁珠包被物，能够提高磁珠包被物的特异性和包被在磁珠上的活性物质的免疫原性，从而提高磁珠包被物在检测时的特异性、信噪比、灵敏度和检出率。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，特别是涉及一种磁珠包被物及其制备方法和检测试剂盒。

背景技术

化学发光平台的免疫检测和免疫诊断的原理是：抗原或抗体通过物理吸附或者化学交联的方式结合到纳米磁珠表面，并保持其免疫学活性，在测定时受检标本(测定其中的抗原或者抗体)按不同的步骤与磁珠表面的抗原或者抗体进行免疫反应，再与标记了示踪物(例如吖啶酯)的抗原或抗体形成复合物，从而根据发光信号进行定量或者定性研究。

将抗原或者抗体包被于纳米磁珠表面的纳米磁珠包被物是发光免疫试剂的重要成分。为了抗原或抗体能稳定结合在磁微粒表面，一般会选择以化学交联的方式对抗原或抗体进行偶联。小分子多肽和半抗原分子因为其分子量过小，直接包被容易导致包被效率较低，包被物生物活性较差，因此常常会先修饰一个亲水性蛋白增加其分子量后，再与磁珠进行偶联反应。常用的修饰蛋白是牛血清蛋白(BSA)，因为其理化性质稳定、廉价易得、较大的溶解度、在水相和有机相(吡啶、DMF)都可以进行偶联反应、操作简单等优点被广泛在各种小分子多肽和半抗原分子的修饰中。

然而，BSA修饰后的小分子多肽和半抗原分子与纳米磁珠的连接效率较低，反应副产物较多，容易使得纳米磁珠包被物的特异性较低，而且传统的BSA修饰的小分子多肽和半抗原分子的免疫原性往往较弱，容易使得发光免疫试剂的信噪比较低，无法满足试剂性能要求。

发明内容

基于此，有必要针对提供一种磁珠包被物的制备方法，该制备方法能够改善磁珠包被物的特异性较低和经BSA修饰后小分子多肽和半抗原分子的免疫原性较弱的问题。

此外，还有必要提供一种特异性较好和免疫原性高的磁珠包被物和包括该磁珠包被物的检测试剂盒。

一种磁珠包被物的制备方法，包括以下步骤：

采用多胺修饰牛血清白蛋白，制备阳离子牛血清白蛋白；及

将纳米磁珠与活性物质通过所述阳离子牛血清白蛋白偶联，制备磁珠包被物。

上述磁珠包被物的制备方法通过将牛血清白蛋白制成阳离子牛血清白蛋白后再与活性物质和磁珠偶联制备磁珠包被物，使得牛血清蛋白具有更多的氨基，等电点从4.9～5.4增加到9.5～11，从而使得牛血清蛋白与活性物质更容易偶联，更多偶联，偶联的副产物更少，进而提高了制得的磁珠包被物的特异性，并且由于牛血清白蛋白的等电点从4.9～5.4增加到9.5～11，这大大提高了活性物质的免疫原性，增强了活性物质结合抗体的能力，从而提高了免疫检测时的信噪比，使得含有上述磁珠包被物的检测试剂盒的灵敏度更高，检出率更好。

在其中一个实施例中，所述将纳米磁珠与活性物质通过所述阳离子牛血清白蛋白偶联制备磁珠包被物的步骤包括：

将所述阳离子牛血清白蛋白与活性物质偶联，制备复合物；及

将所述复合物与纳米磁珠偶联，制备所述磁珠包被物。

在其中一个实施例中，所述多胺为二元胺和/或PEG修饰的二元胺。

在其中一个实施例中，所述二元胺选自乙二胺、1-3二胺基丙烷、二氨基二丙胺和己二胺中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述采用多胺修饰牛血清白蛋白制备阳离子牛血清白蛋白的步骤包括：

将所述多胺、所述牛血清白蛋白和活化剂混合进行脱水缩合反应，制备所述阳离子牛血清白蛋白。