[发明专利]一种用于筛选高表达量细胞系的纳米抗体以及方法和试剂盒

权利要求书

1.一种抗人抗体FC片段的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的VHH链。

2.一种用于筛选高表达量细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建稳定表达人IgG1的细胞系；

（2）对构建得到的细胞系进行培养，然后加入权利要求1所述的纳米抗体，继续培育以后检测Thermo抗体和纳米抗体的平均荧光强度值，根据平均荧光强度值筛选出高表达量的细胞系。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）的具体过程为：

合成抗Her2的人源IgG1抗体对应的DNA序列，将其克隆至表达载体，然后构建重组表达质粒，最后转染CHO-K1细胞即可。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中对步骤（1）构建得到的细胞系进行培育的过程为：

（1）取细胞系，使用PBS清洗，1000rpm离心5分钟后，去除上清，加入0.4mL含1% HAS的CD-CHO细胞培养基的封闭液重悬，调整细胞密度为1×10^e6/mL；

（2）将步骤（1）培育得到的细胞置于37℃培养箱60分钟，每5-10分钟混匀细胞一次，避免细胞贴壁，封闭后，1000rpm离心5分钟，去上清，使用150μl PBS重悬计数，调整细胞密度为2.5×10⁶个/mL。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中加入纳米抗体后的培育过程为：

4℃避光染色30分钟；1000rpm离心，去上清；加入2倍染色体积的预冷PBS洗涤2次，1000rpm离心去上清；再用200μl PBS重悬并去除结团细胞。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述筛选的标准为：

筛选Thermo抗体和纳米抗体平均荧光强度值分别为最高的20%的细胞进行培育，得到高表达的细胞系。

7.一种用于筛选高表达细胞系的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的纳米抗体。