[发明专利]一种定量检测人趋化因子CX3CL1的化学发光试剂盒

说明书

本发明公开了一种定量检测人趋化因子CX3CL1的化学发光试剂盒，包括：包被人趋化因子CX3CL1单克隆抗体的化学发光板，生物素标记的人趋化因子CX3CL1单克隆抗体或多克隆抗体，链霉亲和素标记的酶底物和鲁米诺促发光底物。本发明采用酶促化学发光法，利用化学发光板中的人趋化因子CX3CL1单克隆抗体作为捕获抗体，以生物素标记的人趋化因子CX3CL1单克隆抗体或多克隆抗体作为检测抗体，用鲁米诺酶底物催化发光，利用生物素‑链霉亲和素特异性结合，放大系统检测信号，提高了试剂盒的检测灵敏度和准确性，便于大通量样本检测，同时大大减少了样本使用量，具有高效、便捷的优点，适用于高通量检测人趋化因子CX3CL1。

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，具体涉及一种定量检测人趋化因子CX3CL1的化学发光试剂盒。

背景技术

趋化因子是由多种细胞分泌的分子量在8-14kDa的可溶性蛋白，目前报道的趋化因子家族有48个成员，根据其蛋白氨基酸序列N端的色氨酸保守性可以分为C、CC、CXC、CX3C四类。趋化因子受体是G蛋白偶联受体(GPCR)，趋化因子与其受体结合后，可以激活腺苷酸环化酶、磷脂酶C等经典的GPCR信号通路，调控cAMP、Ca²⁺水平，还可激活MAPK、PI3K及一些酪氨酸激酶信号通路，在免疫趋化、血管再生、创伤愈合、自身免疫、肿瘤发生等过程中起着重要的作用。

CX3CL1是一种独特的趋化因子，为CX3C-类趋化因子家族中唯一的成员。在人类基因组中，CX3CL1位于16号染色体的长臂内(16q13)，编码它的基因由3个外显子组成。与其他趋化因子不同，CX3CL1是一种跨膜蛋白，因此CX3CL1有两种存在形式：膜结合型(mCX3XL1)和分泌型(sCX3CL1)，说明它在趋化因子大家族中具有特殊作用，这是迄今为止任何其他趋化因子都无法比拟的。sCX3CL1是由mCX3CL1近膜侧的一对碱基水解位点经蛋白酶的作用水解而来。sCX3CL1对表达CX3CR1的白细胞具有很强的趋化作用，而mCX3CL1则介导其与CX3CR1阳性细胞的黏附功能。因此，它兼有趋化因子和细胞间黏附分子的双重作用。CX3CL1参与多种生理和病理过程，在多种炎症性疾病、肿瘤中发挥着重要作用。

目前检测人趋化因子CX3CL1多采用酶联免疫分析或荧光免疫分析。市面上已有人趋化因子CX3CL1(Fractalkine)检测试剂盒(ELISA方法)，用于体外定量分析人血清、血浆、唾液、尿液、母乳、细胞裂解液、细胞培养上清中CX3CL1的含量。其原理是预先包被的抗体和检测相抗体都是CX3CL1多克隆抗体。检测抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CX3CL1呈正相关。该类试剂盒虽然具有灵敏度高、特异好的优点，但操作步骤繁琐，对于所需设备要求高，不适应大通量检测的需求。

化学发光免疫分析(CLIA)是继放射免疫分析、酶免疫分析和荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术。大量的实验结果及临床应用资料显示，化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶联免疫分析技术的首选。目前未见采用酶促化学发光法定量检测CX3CL1的相关报道。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种检测灵敏度高、特异性好，操作简便，检测通量高，检测样本量少且不需要太多复杂的辅助设备和试剂的定量检测人趋化因子CX3CL1的化学发光试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

一种定量检测人趋化因子CX3CL1的化学发光试剂盒，包括：包被人趋化因子CX3CL1单克隆抗体的化学发光板，生物素标记的人趋化因子CX3CL1单克隆抗体或多克隆抗体，链霉亲和素标记的酶底物和鲁米诺促发光底物。