[发明专利]一种抗根腐病红掌种质的制备方法及应用

权利要求书

1.一种抗根腐病红掌种质的制备方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）采用红掌组培苗叶片外植体，用剪刀将其剪成1-2cm²大小的外植体，接种到1/2MS+1-3 mg/L 2,4-D+0.05-0.2 mg/L NAA+20 g/L蔗糖的培养基上，在28℃，1000 lx光照强度下进行培养，40-60d诱导出松散的愈伤组织；

（2）将松散的愈伤组织转接到MS+1 mg/L BA+1-2 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖的培养基上，诱导条件与步骤一相同；同时每15 d继代培养1次，继代培养时选择结构松散的愈伤组织转接，3-5次继代培养后获得红掌松散型胚性愈伤组织；

（3）将诱导出的红掌松散型胚性愈伤组织进一步在MS+0.5-1 mg/L BA+0.5-1 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖的培养基上继代增殖培养；

（4）取红掌松散型胚性愈伤组织，将其在超净台中分成直径大小5-10 mm的小块，同时配制0.1%的EMS溶液，溶液采用0.1M磷酸缓冲液，pH7.0作溶剂，将配好的溶液抽滤灭菌备用；将胚性愈伤组织浸泡到EMS溶液中，在25 ℃下浸泡24 h；

（5）将浸泡好的愈伤组织从溶液中捞出，用灭菌的蒸馏水浸泡10分钟，洗掉诱变剂，再用无菌滤纸将多余的水分吸干；

（6）将诱变处理后的红掌愈伤组织转接到事先配制好的筛选培养基上，筛选培养基是在MS+0.5-1 mg/L BA+0.5-1 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖+3-4mM羟脯氨酸；

（7）将接种好诱变愈伤组织的培养瓶放到25℃,2000 lx光照24 h的条件下进行抗逆性愈伤组织筛选，经过大约15 d继代一次，每次继代时，将变黄褐变的愈伤组织淘汰，经过3-5次继代培养后即可获得抗逆性愈伤组织突变体；

（8）将筛选出的愈伤组织转接到MS+10-20% 根腐病菌粗毒素+30-50 mg/L水解酪蛋白的培养基中，其余培养条件和突变愈伤组织筛选时相同；

（9）将获得的再生芽经过DNA水平的检测确定突变的可靠性；再对突变植株进行生理生化指标的检测，主要对抗根腐病进行检测；

（10）将鉴定后的再生植株进行扩繁并进一步保存利用。

2.权利要求1所述抗根腐病红掌种质制备方法在有效提高红掌体细胞离体诱变效率方面的应用。