[发明专利]人DNMT1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种人DNMT1基因3’‑UTR的荧光素酶报告基因载体及其构建方法和应用，该荧光素酶报告基因载体包括荧光素酶报告基因载体和DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段，荧光素酶报告基因载体为pMIR‑REPORT™，DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段的核苷酸序列如下所示：该荧光素酶报告基因载体的构建方法，其包括如下步骤：将经限制性核酸内切酶酶切的DNMT1基因的3’‑UTR区核苷酸片段，通过连接酶，连接到经相同的限制性核酸内切酶酶切的荧光素酶报告基因载体中，通过筛选获得人DNMT1基因的3’‑UTR荧光素酶报告基因载体。

技术领域

本发明属于基因载体技术领域，具体涉及一种人DNMT1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体及其构建方法和应用。

背景技术

DNA甲基化是最为广泛研究的表观遗传调控方式，主要发生在真核细胞基因组上胞嘧啶-鸟苷酸二核苷酸(CpG dinucleotides,CpG)密集区(CpG岛)，通常位于基因的启动子区。在甲基化过程中，甲基在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的作用下从S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)转移到胞嘧啶的5号碳原子上，从而形成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)，从而调控基因的表达。DNA甲基转移酶(DNMTs)家族成员主要包括：DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3L。其中DNMT3a和DNMT3b主要介导DNA从头开始的甲基化。DNMT2的甲基化活性较低，而DNMT3L常作为DNMT3a的辅助因子发挥作用。DNMT1在DNA复制过程中与半甲基化的DNA结合，从而催化另一条DNA胞嘧啶的甲基化，是维持DNA甲基化的关键酶。DNMT1的表达水平会影响基因组DNA的甲基化。

细胞内DNMT1自身的表达水平也受到表观调控的影响。MicroRNAs(miRs)是一群长度在20-25nt左右的内源性小分子非编码RNA，在基因的转录后调节发挥着重要的作用，其与特定信使RNA(Messenger RNA,mRNA)的3’端非编码区(3'-untranslated region,3’-UTR)结合，通过抑制翻译或者引起mRNA的降解而引起基因表达下降。DNMT1的3’-UTR也存在miRs的表观调控影响，通过生物信息学分析和文献检索发现miR-17-5P、miR-19a-3P、miR-19b-3P、miR-20b-5P、miR-483-5P、miR-542-3P、miR-223-3P、miR-152-3P、miR-148a-3P、miR-148b-3P、miR-130a-3P、miR-130b-3P可以通过与DNMT1的3’-UTR结合而有潜在调控DNMT1表达的功能。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明人的目的是提供一种人DNMT1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体及其构建方法和应用。

为达到上述目的，本发明的解决方案是：

目的之一，本发明提供了一种人DNMT1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体，该荧光素酶报告基因载体包括荧光素酶报告基因载体和DNMT1基因的3’-UTR区核苷酸片段。

优选地，荧光素酶报告基因载体为pMIR-REPORT^TM。

优选地，DNMT1基因的3’-UTR区核苷酸片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：