[发明专利]一种检测脂联素和瘦素相关基因的试剂盒

说明书

发明公开了一种检测脂联素和瘦素相关基因的试剂盒，所述试剂盒同时检测如下7个位点：ADIPOQ基因上rs266729、rs17300539、rs1501299、rs2241766位点；ADIPOR1基因上的rs1539355位点；OGDH基因上的rs12112075位点；LEPR基因上的rs1137101位点。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种检测脂联素和瘦素相关基因的试剂盒。

背景技术

脂联素(APN)是由脂肪细胞分泌的一种的糖蛋白，由224个氨基酸组成。由人类APM1/AcDc/ADIP0Q基因编码，其编码基因位于染色体3q27，大小为l7kb的区域内有三个外显子和两个内含子。脂联素通过内分泌、旁分泌及自分泌作用于肝脏、脑、骨骼肌、血管及脂肪组织自身，与其受体结合后主要通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路发挥作用，调节能量代谢。大量研究显示，其具有增强胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉粥样硬化的作用，参与炎症、血脂血糖代谢等病理生理过程，在代谢综合征、保护心肌及抗动脉粥样硬化方面有重要作用。它的分泌失衡与肥胖、糖尿病和冠状动脉粥样硬化等疾病密切相关。因此脂联素相关检测可评估肥胖的程度和类型，监测肥胖的发生和发展，预测II型糖尿病和动脉粥样硬化的发生和发展以及判断肥胖的预后是早期干预的目标，也是减肥效果的指标，并可以用于监测药物引起的肥胖症(抗精神病药)。

瘦素(Leptin)是由脂肪细胞分泌的肽类激素,它在血清中的含量与动物脂肪组织大小成正比。瘦素作用于位于中枢神经系统的受体(Leptin Receptor)从而调控生物的行为以及新陈代谢。当动物体的体脂减少或处于低能量的状态下(例如饥饿)，血清中瘦素的含量会明显下降，从而激发动物的觅食行为，同时降低自身能量消耗。反之，当生物体的体脂增加时，血清中瘦素含量升高，进而抑制进食并且加速新陈代谢。瘦素就是通过这样的负反馈机制来调控生物体的能量平衡以及体重。瘦素由ob基因所编码的167个氨基酸组成的分泌蛋白质，在分泌入血过程中去掉氮端21个氨基酸构成的信号肽，形成146个氨基酸的活性体，参与摄食，体重和能量调节,其生物学功能复杂.现有资料表明，体内瘦素异常与肥胖和营养状态的预测及多囊卵巢综合征的诊断存在广泛联系。

Snapshot技术是一种基于荧光标记单碱基延伸原理的SNP分型技术，具有高特异性、操作简单、经济以及较高通量的特点。Snapshot技术的难点在于针对检测位点的引物设计，需要考虑引物的结构、长度、Tm值、在反应体系中的比例平衡等多个因素。实验方法的完善需要经过大量的测试及优化调整，如何平衡设计引物，使得一次实验反应能更好的检测更多的位点，节约时间与经济成本，便是此技术的关键所在。

发明内容

本发明旨在克服现有技术中的不足，提供一种检测脂联素和瘦素相关基因的试剂盒。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述检测脂联素和瘦素相关基因的试剂盒可同时检测如下7个位点：ADIPOQ基因上rs266729、rs17300539、rs1501299、rs2241766位点；ADIPOR1基因上的rs1539355位点；OGDH基因上的rs12112075位点；LEPR基因上的rs1137101位点。

所述检测脂联素及瘦素相关基因的试剂盒中包括扩增引物和延伸引物，其中，扩增引物的作用是在基因组上大量复制包含所需检测位点的区域。延伸引物则是在上述扩增产物基础上，特异性针对每个检测位点进行一个碱基的延伸。

扩增引物如表1所列，延伸引物如表2所列：

表1

表2