[发明专利]一种重组DNA聚合酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组DNA聚合酶，如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

2.编码如权利要求1所述重组DNA聚合酶的基因序列，如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

3.一种重组载体，含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的一种重组载体，其特征在于：该载体选自pET-30a(+)或pET-28a的任意一种。

5.一种宿主细胞，包含权利要求3或4所述的重组载体。

6.一种重组DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：将权利要求2所述的基因序列连接至表达载体中获得重组载体，将所述重组载体转入感受态宿主细胞获得克隆菌株，经诱导培养、破碎、纯化后获得。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述基因序列是将野生型DNA聚合酶I的氨基酸序列进行定点突变，再连接一段亲和序列后经密码子优化获得；

所述定点突变是将野生型DNA聚合酶I的第313位氨基酸从D突变为V，第315位氨基酸从K突变为L。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述DNA聚合酶的N端添加组氨酸纯化标签，并以镍离子亲和层析法为纯化方法。

9.根据权利要求6-8任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述诱导培养条件为16-40℃，IPTG浓度0.2-5 mM。

10.权利要求1所述一种重组DNA聚合酶在核酸恒温扩增方法上的应用。

11.根据权利要求10所述一种重组DNA聚合酶在核酸恒温扩增方法上的应用，其特征在于：所述重组DNA聚合酶与保存液制备用于进行核酸恒温扩增的试剂盒，所述保存液包括2-100 mM Tris-HCl、20-500 mM KCl、0.1-10 mM DTT、0.1-5 v/v % Tween 20、0.1-5 v/v %NP40、0.01-5mM EDTA、5-70 v/v %甘油；其中，Tris-HCl的pH值为7-11。