[发明专利]一种β-丙氨酸生产菌、构建方法及应用

权利要求书

1.一种β-丙氨酸生产菌，由如下方法构建获得：

以E. coli W3110为出发菌，将其基因组中panD基因的启动子替换为Trc启动子，得到重组菌株E. coli W3110/Trc-panD，记为ALA1；

将源自Bacillus subtilis的外源基因panD整合入质粒pTrc99A中，得到质粒pTrc99A-panD；将质粒pTrc99A-panD导入步骤ALA1中，增强panD基因的表达，得到重组菌株ALA1/pTrc99A-panD，记为ALA2；

将ALA2基因组中的ppc基因的启动子替换为Trc启动子，得到重组菌株ALA2/Trc-ppc，记为ALA3；

将ALA3基因组中的pykA基因敲除，得到重组菌株ALA3/△pykA，记为ALA4；

将ALA4基因组中的aspA基因敲除，得到重组菌株ALA4/△aspA，记为ALA5，即为所述β-丙氨酸生产菌。

2.构建权利要求1所述β-丙氨酸生产菌的方法，其特征在于所述方法如下：

运用CRISPR-Cas9基因编辑技术，将出发菌E. coli W3110基因组中的panD基因的启动子替换成Trc启动子，得到重组菌株W3110/Trc-panD，记为ALA1；

将源自Bacillus subtilis的外源基因panD整合入质粒pTrc99A中，得到质粒pTrc99A-panD；将质粒pTrc99A-panD导入步骤ALA1中，增强panD基因的表达，得到重组菌株ALA1/pTrc99A-panD，记为ALA2；

运用CRISPR-Cas9基因编辑技术，将ALA2基因组中的ppc基因的启动子替换为Trc启动子，得到重组菌株ALA2/Trc-ppc，记为ALA3；

运用CRISPR-Cas9基因编辑技术，将ALA3基因组中的pykA基因敲除，得到重组菌株ALA3/△pykA，记为ALA4；

运用CRISPR-Cas9基因编辑技术，将ALA4基因组中的aspA基因敲除，得到重组菌株ALA4/△aspA，记为ALA5，即为所述β-丙氨酸生产。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（1）Trc启动子核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（2）外源基因panD核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。

5.权利要求1所述β-丙氨酸生产菌在微生物发酵制备β-丙氨酸中的应用。