[发明专利]一种敲除Kan抗性基因的SURE菌株及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 202111375759.4 | 申请日： | 2021-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN114507683A | 公开（公告）日： | 2022-05-17 |
| 发明（设计）人： | 陈书元;李中万;周智;叶国杰;吴振华;王立军 | 申请（专利权）人： | 杭州嘉因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/90;C12N1/21;C12N15/113;A61K39/108;A61P31/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 夏菁 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市钱塘新区和*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 kan 抗性 基因 sure 菌株 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种敲除Kan抗性基因的SURE菌株，其特征在于，由单碱基编辑系统敲除SURE基因组中的Kanamycin抗性基因。
2.根据权利要求1所述SURE菌株，其特征在于，所述单碱基编辑器系统的gRNA序列为SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述SURE菌株，其特征在于，所述单碱基编辑系统为基于dCas9-PmCDA1-UGI的单基因编辑系统。
4.权利要求1所述SURE菌株的构建方法，其特征在于，包括：
步骤1、构建可调控质粒丢失的基因元件和包含针对SURE基因组中Kanamycin抗性基因的单碱基编辑系统的载体；
步骤2、将步骤1所述基因元件插入到所述载体中，获得重组载体；
步骤3、将所述重组载体转化至SURE菌株中进行敲除，获得Kanamycin抗性敲除的Sure菌株；
步骤4、启动可调控手段控制所述基因元件，使Kanamycin抗性敲除的Sure菌株中的重组载体丢失，获得纯净的Kanamycin抗性敲除的Sure菌株。
5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，步骤1所述可调控质粒丢失的基因元件为温敏型复制子，步骤4所述可调控手段为调控温度。
6.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，所述温敏型复制子为pSC101 orirepA101。
7.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述单碱基编辑系统的gRNA序列为SEQID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
8.权利要求1-3任意一项所述SURE菌株或权利要求4-7任意一项所述构建方法在构建AAV载体或疫苗制备中的应用。
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