[发明专利]可缓解神经元缺氧缺糖损伤的多肽

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及可缓解神经元缺氧缺糖损伤和缺血性脑梗死的多肽。本发明基于突触素蛋白Synaptotagmin1(Syt1)的linker结构T112位点，设计短肽Tat‑syt1^WT(Tat‑KDVKDLGKTMKDQ)和Tat‑syt1^T112A(Tat‑KDVKDLGKAMKDQ)。利用原代培养的海马神经元缺氧缺糖为筛选体系，以MAP2染色和ATP含量检测为指标，筛选到能够缓解神经元缺氧缺糖损伤的短肽Tat‑syt1^T112A(Tat‑KDVKDLGKAMKDQ)。Tat‑syt1^T112A是一种新的可以缓解神经元缺氧缺糖损伤的多肽，为脑缺血神经损伤保护与治疗提供新的途径与方法。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及可缓解神经元缺氧缺糖损伤的多肽。

背景技术

“脑卒中”(CerebralStroke)又称“中风”，是一种急性脑血管疾病，因血管阻塞导致血液不能流入大脑或由于脑部血管突然破裂而引起的脑组织损伤疾病，包括缺血性和出血性卒中两种常见类型。缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，占脑卒中总数的80％。此外，颈内动脉和椎动脉闭塞和狭窄也可能发生缺血性脑卒中，严重者可能导致死亡。全球每年约有1500万人受脑卒中疾病的影响，脑卒中是目前导致人类死亡与残疾的三大主要疾病之一，具有高致死率、高致残率和高复发率的特点，严重危害人类健康。据2010年相关部门的统计，我国包括脑卒中在内的神经精神疾病的经济负担在所有疾病中居首位，约占所有疾病经济总负担的20％，给家庭和社会带来巨大的心理和经济负担(WHO《全球疾病负担》)，其中缺血性脑卒中(发病率200/10万)每年直接医疗费用高达200多亿元。

目前，治疗急性脑卒中的选择非常有限。rtPA药物可以溶解血栓从而恢复血流，是美国药品监管局唯一批准用于治疗脑卒中的药物。然而，rtPA治疗急性脑卒中病人时间仅在病发4.5h内。另外，由于临床应用上的严格控制，能够使用rtPA进行治疗的脑卒中病人仅有5％-10％。

1989年Longa E.Z等人通过在大鼠的大脑中动脉插入一根硅胶涂布的线栓，堵住血进入大脑，成功构建了脑缺血的动物模型，这一模型大鼠，为探究脑缺血损伤的分子机制研究和治疗提供了可能性。与此同时，除了插入线栓堵住血管，光栓法，血栓法等构建脑缺血鼠模型都有报道，其各自都有优点与缺点。光栓法造模具有可重复性高，但是需要开颅手术，且损伤区域仅为大脑皮层。血栓法是通过抽取大鼠的血液，然后处理血液成为颗粒状，最后注射到大鼠大脑中动脉堵住血管。其优点是更加接近人的脑缺血疾病，可以研究如何溶解血栓，其缺点为堵塞造成的梗死区域不稳定。线栓堵塞法构建脑缺血模型为目前脑卒中领域应用最为广泛的方法。

体外培养的细胞，更换无糖培养基后放入无氧气培养箱培养(即进行缺氧缺糖处理)，是研究缺血性中风的一种体外模型。

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看作细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

ATP，作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降；细胞内ATP含量是检测细胞系及神经元缺氧缺糖损伤的一种标志，ATP含量下降标志着神经元损伤，同时，神经元形态也反应出神经元损伤。