[发明专利]甲萘醌作为制备治疗肠癌肿瘤药物中的应用

权利要求书

1.甲萘醌作为制备治疗肠癌肿瘤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述甲萘醌促进肿瘤细胞发生程序性死亡。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述程序性死亡肿瘤细胞发生凋亡和坏死细胞机制来实现。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述甲萘醌靶向MAPK8诱导细胞发生坏死和凋亡。

5.根据权利要求1-4任一项所述甲萘醌作为制备治疗肠癌肿瘤药物的筛选方法，其特征在于：其包括以下步骤：

(1)、坏死通路敏感细胞系L929-FADD基因敲除细胞株复苏、培养与冻存；

(2)、FDA药物库的若干小分子化合物定量，且以肿瘤坏死因子TNF-α及其复合物作为阳性对照药物；

(3)、构建用于制备治疗肿瘤的药物筛选的细胞模型肠癌细胞HT-29；

(4)、检测步骤(3)中所述细胞模型的细胞存活率，并筛选候选药物为甲萘醌；

(5)、蛋白免疫沉淀检验步骤(4)中所述候选药物在程序性死亡MAPK8信号通路的表达。

6.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(3)的具体方法为：在液氮中取出冻存的L929-FADD-KO细胞和HT-29细胞，迅速置于37℃水浴，不断晃动融解细胞，然后将所述L929-FADD-KO细胞和HT-29细胞分别转入培养皿中加入培养基进行过夜培养，细胞贴壁后换液继续培养，待细胞生长至90％密度时传代；其中，

所述HT-29细胞的培养基为含10％体积分数胎牛血清的高糖DMEM培养基，在5％体积分数CO₂、37℃和饱和湿度条件下培养；

所述L929-FADD-KO细胞的培养基为含10％体积分数胎牛血清的高糖DMEM培养基且加入0.05μL/mL pruo和0.33μL/mL Nec-1，在5％体积分数CO₂、37℃和饱和湿度条件下培养；

再选生长状态好、生长旺盛的HT-29细胞和L929-FADD-KO细胞用PBS洗两次后，用胰酶消化至细胞变圆，用RPMI-1640培养基终止反应，800rpm离心5min后弃上清，加入冻存液，将细胞分装在冻存管中，放入程序降温盒中保存于-80℃超低温冰箱中，24h后转移至液氮中；其中，

所述RPMI-1640培养基内含10％体积分数胎牛血清、1％体积分数青霉素和链霉素，终止反应条件为：95％体积分数空气、5％体积分数二氧化碳、37℃；

所述冻存液的成分为：10％体积分数二甲基亚砜和90％体积分数小牛血清。

7.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于：步骤(2)中，所述复合物包括TNF-α、Smac模拟物Smac mimetics和泛素半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK。

8.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于：步骤(2)中，所述小分子化合物定量为：每管体积为100μL，浓度为10mmol/L，使用浓度为30μmol/L，所述TNF-α、复合物的使用浓度分别为30μmol/L作为阳性对照药物。