[发明专利]一种缓解玉米幼苗深播胁迫最佳浓度的方法

权利要求书

1.一种缓解玉米幼苗深播胁迫最佳浓度的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)材料收集：一份深播敏感玉米自交系自330；

2)配制SL处理液：独脚金内酯(rac-GR24，C₁₇H₁₄O₅)原粉用丙酮稀释溶解，配成10mM母液，然后稀释成：SL0.05(0.05mmol·L^-1)，SL0.1(0.1mmol·L^-1)，SL0.5(0.5mmol·L^-1)，SL0.8(0.8mmol·L^-1)，SL1.0(1.0mmol·L^-1)，SL1.5(1.5mmol·L^-1)和CK(0mmol·L^-1，即双蒸水)；

3)种子处理：从步骤1)中精选种子并进行消毒、浸泡处理；

4)深播胁迫试验：将种子播种在填有灭菌蛭石与蒸馏水按照5g：1mL比例统一配土后的PVC管(直径17cm，高50cm)中，管底用尼龙网封底，种子上覆土15cm为深播胁迫，每管10粒，每个处理三次重复；在昼/夜(25±1)/(20±1)℃的气候培养箱中培养，每隔2d每管定量浇50mL或对应处理溶液；待CK溶液浸种的种子长至三叶一心期时，用双蒸水快速冲洗掉幼苗根部蛭石，并用灭菌滤纸吸干附着水，进行指标测定；

5)测定项目与方法：施加外源SL后玉米耐深播性综合评价：采用隶属函数法对15cm播深下施加不同浓度的外源SL处理的玉米耐深播性进行综合评价，隶属函数计算公式如下：

U_ij＝(X_ij-X_ijmin)/(X_ijmax-X_ijmin)

式中，U_ij表示第i处理下第j指标的深播隶属值，X_ij表示第i处理下第j指标的测定值，X_ijmin与X_ijmax表示所有处理下第j指标的最小值与最大值，分别累计各性状在相应处理下的隶属函数值，并求其算数平均数进行比较，其值越大则表示外源SL缓解深播胁迫的效果越好；

6)最佳浓度的应用：通过高效液相色谱法(HPLC)测定玉米胚轴中玉米素(ZT)、生长素(IAA)，赤霉素(GA₃)的相对含量，内源性油菜素甾醇(BR)和独脚金内酯SL的相对含量通过HPLC串联质谱(HPLC-MS/MS)测定；

7)结果分析：先根据各处理下的测定值，采用Microsoft Excel 2019软件进行处理并绘图，并采用SPSS19.0软件对各测定值进行Duncan多重比较方差分析，揭示了外源SL缓解玉米深播胁迫的形态响应，根据相关性分析，评价SL缓解深播胁迫主要通过玉米的那些部位发挥重要的作用，再采用隶属函数法，科学、客观、综合评价不同浓度外源SL对玉米深播胁迫的综合性效果。

2.根据权利要求1所述的一种缓解玉米幼苗深播胁迫最佳浓度的方法，其特征在于，所述步骤3)中种子的处理方式具体如下：

从步骤1)中精选饱满、均匀一致、无破损的种子，先用体积百分比为0.5％的NaClO溶液消毒10min，然后用双蒸水冲洗种子3次，再用灭菌滤纸吸干附着水，得到深播敏感玉米自交系消毒种子并将所得的种子在蒸馏水中浸种12h。

3.根据权利要求1所述的一种缓解玉米幼苗深播胁迫最佳浓度的方法，其特征在于，步骤5)中的测定项目与方法还包括：

幼苗形态指标测定：分别测定步骤4)中各试验处理下的玉米幼苗的中胚轴长(MES)＝从种子到胚芽鞘节之间的距离，胚芽鞘长(COL)＝从胚芽鞘节到胚芽鞘顶端的距离，苗长(SDL)＝中胚轴和胚芽鞘接合点以上部分的长度，根长(RL)＝最长根的长度，苗鲜重(SDW)＝中胚轴和胚芽鞘接合点以上部分的重量，根鲜重(RW)＝整个幼苗根部的重量，中胚轴鲜重(MESW)＝从种子到胚芽鞘节之间的重量，胚芽鞘鲜重(COLW)＝从胚芽鞘节到胚芽鞘顶端的重量。