[发明专利]赛拉嗪半抗原和人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种赛拉嗪半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。用本发明的赛拉嗪人工抗原免疫动物，可以得到效价高，灵敏度高的特异性抗体。本发明提供的赛拉嗪半抗原及其制备的抗体，为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的赛拉嗪检测方法提供了新手段。利用本发明提供的半抗原与载体蛋白的偶联物制备赛拉嗪抗体，制备过程简单、经济，抗体对赛拉嗪的检测灵敏度可达0.25ng/mL，实用价值高，特别是在兽药残留检测中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体地说，涉及赛拉嗪半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

背景技术

赛拉嗪(Xylazine，XYL)为镇痛性化学保定药，其作用机理是通过与中枢神经系统突触前膜的受体结合,并激动突触前膜的抑制性自身受体,抑制去甲肾上腺素的释放,从而起到镇静、镇痛和中枢性肌松作用。目前，该药主要用于马、牛、羊等动物的镇静与镇痛。已有研究表明，赛拉嗪在动物源性食品中的残留会对消费者的健康带来极大危害，长期食用含有赛拉嗪残留的动物源食品可能会出现恶心、呕吐、头晕，无力等症状，严重的还会出现精神失常。因此，开发可用于动物源性食品中的赛拉嗪残留检测方法，对有效控制动物源性食品中赛拉嗪的残留，保障人民的健康具有重大意义。

目前，已有的赛拉嗪检测方法主要包括高效液相色谱(HPLC)，液相色谱/串联质谱(LC-MS)和气相色谱/串联质谱(GC-MS/MS)等。然而，这些方法所需的大型仪器价格昂贵、操作复杂、便携性差，难以实现生产一线的检测，并且这些方法的前处理过程较为复杂、费时，不适用于大量样品的快速检测。因此，有必要建立一种针对赛拉嗪的简单、快速、可靠的检测方法。基于抗原-抗体特异性反应的免疫分析技术，具有检测速度快，检测成本低的优点。然而，免疫分析技术的核心是获得对赛拉嗪具有高特异性和高灵敏度的抗体，因此，合理设计赛拉嗪半抗原，开发一种简单、快捷、用于检测赛拉嗪的抗体显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供赛拉嗪半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种赛拉嗪半抗原，其结构如式(I)或式(II)所示：

第二方面，本发明提供所述赛拉嗪半抗原的制备方法。

式(I)所示赛拉嗪半抗原的制备方法，包括如下步骤：

S1：将241.86mg 6-溴己酸加入到20mL二氯甲烷中，再加入5mL二氯亚砜，95-110℃回流反应1-3h(优选1h)，直接旋转蒸发至干，滴加到10mL含有5％碳酸氢钠的叔丁醇溶液中，室温反应过夜，抽滤后倒入10mL 5％碳酸氢钠水溶液中，30mL乙酸乙酯进行提取，旋转蒸发至干；

S2：以N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂，在20mL N,N-二甲基甲酰胺中加入2.64g 6-溴己酸叔丁酯和3.16g赛拉嗪，再加入2.70g碳酸钾和1.23g碘化钾，95-125℃(优选100℃)反应过夜后直接倒入水中，使用30mL乙酸乙酯提取，旋转蒸发至干，利用硅胶柱进行纯化，收集产物；

S3：将S2所得产物溶于20mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温反应2-4h(优选2h)，浓缩至恒重，倒入水中，使用20mL二氯甲烷进行提取，干燥旋干二氯甲烷，即得。

式(II)所示赛拉嗪半抗原的制备方法，包括如下步骤：

(1)将6.42g 4-溴甲基苯甲酸加入到5mL二氯亚砜中，80-100℃回流反应1-3h(优选1h)，直接旋转蒸发至干，滴加到10mL含有5％的碳酸氢钠的叔丁醇溶液中，室温反应过夜，抽滤后倒入8mL 5％碳酸氢钠水溶液中，30mL乙酸乙酯提取，旋干；