[发明专利]芦笋与意大利野生种间杂交F1

权利要求书

1.一种芦笋与意大利野生种间杂交F₁代花药小孢子诱导获得胚状体再生植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在芦笋与意大利野生种间杂交F₁代雄株开花前，施加磷钾肥和钙硼镁肥，所述钙硼镁肥由液钙、液硼、悬浮镁和水按照12mL：15mL：12mL：15kg的比例混合得到；至雄株开花初期，选取健壮雄株上的部分花蕾进行保留，其余花蕾全部疏掉，待花蕾发育充分之后，再从该植株上选取适期饱满花蕾，灭菌后剥取花药，接入装有固体培养基和液体培养基的培养皿中，封口；

(2)将培养皿置于4℃的条件下暗培养3-5d，然后再置于26℃的条件下继续暗培养，培养至第15-20d，小孢子从花药开裂处自然释放，进入液体培养基；

(3)培养至第35-45d，小孢子发育形成球型胚或心型胚；此时再添加5mL液体培养基，培养至第50-55d，小孢子发育形成鱼雷型胚或子叶型胚；培养至56-65d，将子叶型胚转接至胚萌发培养基中，进行每天12-14h光照培养即可发育形成健壮丛生芽，再转入特定激素浓度的生根培养基诱导生根，最后得到根系健壮的可移栽植株；

所述步骤(1)中的所述固体培养基为：碳源为蔗糖和葡萄糖，添加有琼脂作为凝固剂的pH＝5.8的MS培养基；所述液体培养基为pH＝5.8的添加有营养液的MS培养基，所述营养液包括：40g﹒L^-1的蔗糖，20g﹒L^-1的葡萄糖，0.5-1.0mg﹒L^-1的6-苄胺基腺嘌呤6-BA，0.5-1.0mg﹒L^-1的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D，0.1-1.0mg﹒L^-1萘乙酸NAA，0.03-0.05mg﹒L^-1谷胱甘肽L-GLU，200mg﹒L^-1谷氨酰胺GLU；

将所述固体培养基和所述液体培养基装入所述培养皿的过程为：

将所述固体培养基和所述液体培养基灭菌，然后先向培养皿中加入所述固体培养基15mL，待所述固体培养基凝固后，再加入所述液体培养基10mL；

所述步骤(3)中的特定激素浓度的生根培养基为：MS培养基添加50g﹒L^-1的蔗糖，0.5mg﹒L^-1吲哚丁酸IBA，0.1mg﹒L^-1萘乙酸NAA，200mg﹒L^-1谷氨酰胺GLU，8g﹒L^-1的琼脂粉。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述固体培养基的灭菌条件为：121℃，1.1MPa，20min。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，采用内装有0.22微米微孔滤膜的过滤器对所述液体培养基进行灭菌。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中，选取花蕾灭菌接种至培养皿后需要进行预处理，具体过程为：将花蕾灭菌接种至培养皿后置于4℃的条件下3-5d。

5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中采用石蜡膜进行封口。