[发明专利]一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡

权利要求书

1.一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳；所述的NC膜上设置有C线和T线，所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体，所述的T线上包被有BSA-NOR交联抗原；所述的金标垫上含有纳米花金标记的抗诺氟沙星单克隆抗体5B1。

2.根据权利要求1所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述金标垫上的纳米花金标记的抗诺氟沙星单克隆抗体5B1的其制备方法为：取10mL纳米花金溶液，加入300 μL 0.1 M K₂CO₃溶液，混匀后备用；加入500 μL mAb，于冰上搅拌；称量0.1 g BSA并缓慢加入到上述溶液中，于冰上继续搅拌；称量0.1g PEG-20000并缓慢加入到上述溶液中，于冰上继续至完全溶解后4℃静置过夜；离心收集上清中的纳米花金标抗体5B1，之后离心收集中间层蓝紫色流动相；向含有蓝紫色流动相中加入纳米花金标稀释液，制得浓度为0.068 mg/mL的纳米花金标记的抗诺氟沙星单克隆抗体5B1溶液；纳米花金标记的抗诺氟沙星单克隆抗体5B1溶液以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上后干燥；所述纳米花金标稀释液：10 mL PBS+0.1g BSA+0.05 g PEG-20000。

3.根据权利要求2所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述纳米花金溶液的制备方法为：用100 mL ddH₂O溶解1 g HAuCl₄制备获得氯金酸水溶液，取1 mL 1wt%的氯金酸水溶液溶于100 mL ddH₂O，混匀后加热煮沸，随后加入1.5 mL1wt%的柠檬酸三钠溶液，继续加热观察溶液的颜色逐渐稳定成酒红色，放置室温冷却后，用无菌ddH₂O定容至100 mL，即得到胶体金溶液；取750 μL1wt%的氯金酸水溶液加入100 mLddH₂O中，加入500 μL的胶体金溶液混匀，再加入300 μL 1wt%的柠檬酸三钠摇匀，最后加入1 mL 30 mM的对苯二酚溶液，搅拌2 min即得纳米花金溶液。

4.根据权利要求2所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于，所述纳米花金颗粒的最大吸收峰为570 nm。

5.根据权利要求2所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述抗诺氟沙星单克隆抗体5B1是由保藏编号为CGMCC NO. 21013的抗诺氟沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株5B1分泌获得；所述抗诺氟沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株5B1已于2020年11月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

6.根据权利要求1所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述T线上包被的BSA-NOR交联抗原，其制备方法为：将 1 mg NOR用 1 mL二甲基亚枫溶解后，加入 13 mg N-羟基琥珀酰亚胺和 38 mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，37℃条件下避光反应 24 h；4000 r/min离心 5 min后取上清液逐滴加入到 4mL含 10 mg BSA的PBS缓冲液中，37℃条件下避光振荡反应 24 h；反应完用 PBS透析3 d，即获得BSA-NOR交联抗原；将0.05 mg/mL的BSA-NOR交联抗原以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在T线上后干燥。

7.根据权利要求1所述的一种基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡，其特征在于：所述C线上包被的羊抗鼠IgG的抗体是0.06 mg/mL的羊抗鼠IgG的抗体溶液以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在C线上干燥后得到的。

8.权利要求1所述基于金纳米花颗粒的诺氟沙星免疫快速检测卡在诺氟沙星检测中的应用。