[发明专利]糖尿病性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，公开了一种糖尿病性视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用，所述糖尿病性视网膜病变检测生物标记物为miRNA‑375‑3p，所述标记物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明确定miRNA‑375‑3p表达量的改变，与糖尿病性视网膜病变的发生存在显著地相关性。miRNA‑375‑3p可以作为糖尿病性视网膜病变早期诊断的生物标记物，定期评估糖尿病性视网膜病变的进展和治疗后的复发情况。本发明为糖尿病性视网膜病变疾病的早期诊断、预后判断和早期干预治疗提供重要的参考依据，具有较大的实际临床价值，可以及早进行干预和治疗，减少非高危复发病人不必要的治疗和花费。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种糖尿病性视网膜病变检 测生物标记物、检测试剂盒及应用。

背景技术

目前，糖尿病视网膜病变是主要的致盲性眼病，视网膜微血管病变被认为 是主要病因。主要表现为高血糖损伤血-视网膜屏障后，引起微血管闭塞，进而 导致新生血管形成，视功能下降，可严重影响患者生活质量。在糖尿病性视网 膜病变早期，患者可能并没有明显的症状，直至开始出现明显视力下降或视野 缺损时，方才检查出相关缺血性眼病，但此时的视力损害已不可逆。目前，针 对糖尿病性视网膜病变的治疗方式主要包括针对原发病的药物、玻璃体内药物 注射、视网膜激光和手术等，而这些对症治疗方式很难逆转视神经退变和视力 下降。因此亟待对糖尿病性视网膜病变的发生进行早期诊断和预后评估，寻找 出新型创伤性小、操作性强和灵敏度高的生物标志物。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约22nt的内源性单链非编码 RNA，其在进化过程中也保持高度保守。miRNA通过与目的mRNA的3’端非 编码区结合对翻译过程进行阻滞或者直接引起mRNA降解，从而对转录水平及 转录后水平进行调控，并参与多种生物学过程，与肿瘤、心血管疾病和代谢系 统疾病等密切相关，有望成为新型的疾病诊断生物标志物。

但是，目前尚无miRNA-375-3p作为糖尿病性视网膜病变诊断的生物学标记 物的报道。因此，亟需一种新的糖尿病性视网膜病变检测生物标记物，以弥补 现有技术的空白。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：对糖尿病视网膜病变的早 期诊断和预后评估缺乏创伤性小、操作性强和灵敏度高的生物标志物，且目前 尚无miRNA-375-3p作为糖尿病性视网膜病变诊断的生物学标记物的报道。

解决以上问题及缺陷的难度为：新型生物标记物的筛选需要以测序技术为 基础，qPCR技术验证，细胞表型实验验证标记物干预对细胞功能的影响和大量 的临床样本验证其表达量。验证过程需要科学严谨的实验设计以及有意义的统 计学分析。

解决以上问题及缺陷的意义为：针对糖尿病视网膜病变患者的早期诊断和 预后评估提供一个新型的疾病诊断标记物，这可能为糖尿病视网膜病变的诊断 和治疗提供新的思路。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种糖尿病性视网膜病变检测生 物标记物、检测试剂盒及应用，旨在解决现有技术中的一部分问题或至少缓解 现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种糖尿病性视网膜病变检测生物标记物，所述糖 尿病性视网膜病变检测生物标记物为miRNA-375-3p，所述标记物的核苷酸序列 如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供一种用于糖尿病性视网膜病变检测生物标记物检测的引物， 所述引物序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的另一目的在于提供一种应用所述的糖尿病性视网膜病变检测生物 标记物的糖尿病性视网膜病变实时荧光定量PCR检测试剂盒，所述糖尿病性视 网膜病变实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括PCR扩增体系，所述PCR扩增 体系包括2×EZ-probe qPCRMaster Mix for microRNA，Probe 10μM，特异性的 qRT-PCR的上游引物，即特异性识别miR-375-3p或U6，通用3’端下游引物。