[发明专利]3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法

权利要求书

1.3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，包括如下步骤：

步骤一：第1天，将外周血单个核细胞置于含有IL-2、淋巴母细胞激活因子、自体血清的培养基中进行培养；

步骤二：第3天，加入含有IL-2、3D肿瘤全抗原、自体血清的培养基中进行诱导激活培养；

步骤三：第5天，加入含有IL-2、T细胞双信号激活因子、自体血清的培养基中进行活化增殖培养；

步骤四：第7-15天，每2天定量加入含有IL-2、OKT-3、灭活胎牛血清的培养基进行细胞毒性T细胞扩增培养。

2.根据权利要求1所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤一中所述的淋巴母细胞激活因子为植物凝集素、刀豆凝集素、菜豆凝集素中的一种或任意组合，其浓度为0.1μg/ml-5μg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤一中所述的培养基为X-Vivo15培养基、RPMI1640培养基、DMEM/F12培养基中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤二中所述的3D肿瘤全抗原为负载肿瘤全裂解物抗原的PLGA、明胶、海藻酸钠微球，其直径为0.1μm-10μm，浓度为0.1ml/L-0.3ml/L。

5.根据权利要求1或4所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤二中所述的3D肿瘤全抗原为自体原代微肿瘤抗原、异体原代微肿瘤抗原中的任意一种。

6.根据权利要求1所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤三中所述的T细胞双信号激活因子为OKT-3、IL-12、IFNγ中的一种或任意组合，其中OKT-3的浓度为5ng/ml-50ng/ml，IL-12的浓度为5ng/ml-50ng/ml，IFNγ的浓度为5ng/ml-50ng/ml。

7.根据权利要求1所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤四中所述的OKT-3的浓度为5ng/ml-50ng/ml。

8.根据权利要求1或7所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤四中所述的灭活胎牛血清的浓度为0.1％-1％。

9.根据权利要求1所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中IL-2的浓度均为100U/ml-2000U/ml。

10.根据权利要求1或9所述的3D肿瘤全抗原诱导激活的CTL细胞体外扩增培养方法，其特征在于，步骤一、步骤二和步骤三中自体血清浓度均为1％-5％。