[发明专利]一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途

权利要求书

1.一种ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途。

2.如权利要求1所述的ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途，其特征在于，所述ASB17的Human ASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：1所示，所述ASB17的MouseASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种应用如权利要求1～2任意一项所述的ASB17在制备TRAF6相关炎症性疾病药物中的用途的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，所述验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法包括以下步骤：

步骤一，小鼠原代细胞BMDCs和BMDMs分离；

步骤二，蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀以及免疫荧光；

步骤三，蛋白质稳定性检测及泛素化实验。

4.如权利要求3所述的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，步骤一中，所述小鼠原代细胞BMDCs和BMDMs分离，包括：

(1)分离小鼠骨髓来源树突状细胞BMDCs

准备6到8周龄的野生小鼠和ASB17^-/-小鼠，无菌条件下，取出所有股骨和胫骨，在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器吸取PBS冲洗骨髓至培养皿中，至骨完全变为白色；细胞悬液过滤，离心，RPMI 1640培养基(包含20ng/ml GM-CSF)重悬，100mm细胞培养皿中培养；第3天，向培养皿中再加入10ml RPMI 1640培养基；第6天和第8天，培养液离心后用完全培养液重悬细胞沉淀，随后铺至原细胞皿；第10天得到BMDCs；

(2)分离小鼠骨髓来源巨噬细胞BMDMs

准备6到8周龄的野生小鼠和ASB17^-/-小鼠，无菌条件下，取出所有股骨和胫骨并在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器反复冲洗出骨髓至培养皿中，至骨变白；悬液过滤，再离心，用红细胞裂解液除去红细胞；向培养皿中加入RPMI 1640培养基；第3天和第5天换为新鲜RPMI 1640培养基，第6天即为BMDMs。

5.如权利要求3所述的验证ASB17制备治疗TRAF6相关炎症性疾病药物的方法，其特征在于，步骤二中，所述蛋白质免疫印迹，包括：

用裂解液处理细胞，并超声破碎后，再用Bradford法测定细胞蛋白的浓度；得到的细胞裂解液经过处理后，在8～12％的SDS-PAGE胶中跑胶2h，SDS-PAGE胶上跑开的蛋白质经转膜设备，经2h转到NC膜上；将NC膜用5％的脱脂牛奶封闭，经过一抗4℃孵育过夜和二抗室温孵育1h，再由化学显色液显色，最后通过化学发光仪观察目的蛋白条带；其中，所述脱脂牛奶由PBST配制。