[发明专利]一种抗糖化寡肽-5（AdP）的制备及其应用

说明书

一种抗糖化寡肽‑5（AdP）的制备及其应用，采用基因工程手段生产AdP，包括载体构建筛选、制备种子液、诱导表达、分离纯化等步骤，相较于传统生物肽合成方法，具有污染小、设备成本低、操作简单的特点，且生产的AdP结构更接近天然，活性更好，纯度更高；AdP主要以丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸等为主，可以促进成纤维细胞的生成，保持肌肤活力，具有良好的抗衰老功效，抑制黑色素生成，首次发现其可以保护大分子蛋白，有效阻止蛋白糖基化的发生，具有保湿修复、祛黄提亮、祛皱抗糖化的多重功效。

技术领域

本发明属于化妆品领域，尤其涉及一种具有抗糖化功效的寡肽-5（AdP）及其制备方法。

背景技术

寡肽-5（AdP）是由氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白质 1(aminoacyl-tRNAsynthetase-interacting multi-functionalprote i n1,AIMP1)衍生来的一种寡肽。

AIMP1又称为 p43、MSC p43或者proEMAPII，是哺乳动物中相当保守的一种蛋白，几乎在所有细胞中都表达，最早是被发现位于一个巨大的氨基酰 tＲNA合成酶（aminoacyl-tRNA synthetase, aaRS）复合物的中心位置，作为一种非酶类辅助蛋白参与该复合物的形成，对维持该复合物的结构具有关键性作用。AIMP1广泛分布于细胞核、细胞质、内质网，不同的亚细胞定位具有不同的功能，如参与蛋白质的合成、调节自身免疫反应等，也可作为细胞因子分泌到胞外，参与调控成纤维细胞的增殖，内皮细胞的迁移和死亡，巨噬细胞和树突细胞的激活和成熟，作用于胰腺细胞调控血糖平衡，作用于皮肤细胞抑制黑色素的生成。AIMP1全长312个氨基酸，包括多种功能区，寡肽-5（AdP）作为AIMP1的衍生肽，选取了AIMP1上与皮肤护理相关的功能区域，整合为73个氨基酸大小的寡肽。

AdP主要以丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸等为主，文献报道其具有与AIMP1相似的功能，可以促进成纤维细胞的生成，保持肌肤活力，具有良好的抗衰老功效，同时可以抑制黑色素生成，是优秀的美白产品，具有重要的医用和美容价值。

当前全球人口老龄化日趋严峻，祛黄、亮白、去皱等多功效类护肤品需求越来越大，开发多功效、高活性，易得的生物活性肽类原料亟待发展。当前生物活性多肽的加工方法有酶解法、固相、液相合成法、酸解法、碱解法、微生物发酵法等，存在投资大、占地面积多、工艺繁杂、污染大、分子量无法操纵等缺点。随着基因工程的大力发展，用基因工程手段制造生物活性多肽，可以得到结构更接近天然，活性更好，纯度更高的多肽，且操作方便，简单易得。

本发明应用基因工程技术，开发了一种利用大肠杆菌表达寡肽-5（AdP）的制备方法，相较于传统合成AdP的方法，具有污染小、投入少，操作简便，更接近天然结构的特点。将其应用于化妆品中，除具有文献报道的抗衰、美白功效外，首次发现其可以保护大分子蛋白，有效阻止蛋白糖基化的发生，具有保湿修复、祛黄提亮、祛皱抗糖化的多重功效。

发明内容

本发明目的在于应用基因工程技术，提供一种抗糖化寡肽-5（AdP）的制备及其应用，以解决利用传统手段生产寡肽-5（AdP）的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明的一种抗糖化寡肽-5（AdP）的制备及其应用的具体技术方案如下：

一种抗糖化寡肽-5（AdP）的制备及其应用，包括如下步骤：

S1:制备种子液：将经基因重组构建表达筛选后活化的重组表达菌株ER2566-pET28a-AdP，按比例接种于含卡那霉素（Kan）抗性的LB培养基中，在一定温度、速度下经摇床培养；

S2: 发酵：当菌液的A600达到相应值时，按一定比例的接种量将种子培养液接入发酵罐中，设定温度、转速、用氨水调节pH进行发酵培养；

S3:诱导：当A600达到相应值，加入一定量的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导，诱导一定时间后，目的蛋白AdP表达于菌种中；