[发明专利]一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用在审
| 申请号: | 202111150536.8 | 申请日: | 2021-11-26 |
| 公开(公告)号: | CN113943766A | 公开(公告)日: | 2022-01-18 |
| 发明(设计)人: | 杨秀芬;王培培;郑春阳 | 申请(专利权)人: | 守正创新生物科技(天津)有限公司 |
| 主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02;C07K14/435;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/36;A61K8/64;A61Q7/00;A61Q17/04;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08;C12R1/19 |
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| 地址: | 300384 天津市滨海新区天*** | 国省代码: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 糖化 寡肽 adp 制备 及其 应用 | ||
1.一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用,其特征在于,包括如下步骤:
S1:制备种子液:将经基因重组构建表达筛选后活化的重组表达菌株ER2566-pET28a-AdP,按比例接于含卡那霉素(Kan)抗性的LB培养基中,在一定温度、速度下经摇床培养;
S2:发酵:当菌液A600达到相应值时,按比例的接种量将种子培养液接入发酵罐中,设定温度、转速、用氨水调节pH进行发酵培养;
S3:诱导:当A600达到相应值,加入一定量的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导,诱导一定时间后,目的蛋白AdP表达于菌种中;
S4:分离纯化:将发酵液用冷冻离心机离心,弃上清液,沉淀用数倍量的缓冲液重悬分散菌体,经高压均质机处理,再用冷冻离心机离心收集上清液,超滤,收集流穿,层析系统上样洗脱,收集目的峰,分子筛上样洗脱,收集含AdP的洗脱峰,洗脱液在一定温度下保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用,其特征在于,所述S1步骤中的培养条件为27-42℃,100-300rpm,摇床培养。
3.根据权利要求1所述的一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用,其特征在于,所述S2步骤中当A600=1.0~2.0时,按照6-10%的接种量将种子培养基接入发酵罐中,设定温度为27-42℃,转速200-500rpm,用氨水调节pH。
4.根据权利要求1所述的一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用,其特征在于,所述S3步骤中当A600=7.0-9.0时,加入5-10mL0.5mM的IPTG,10-20℃诱导2-5小时,目的蛋白AdP表达于菌种中。
5.根据权利要求1所述的一种抗糖化寡肽-5(AdP)的制备及其应用,其特征在于,所述寡肽-5(AdP)可以应用于化妆品领域。
6.一种寡肽-5(AdP)在抗糖化化妆品中的应用,其特征在于,化妆品的形式包括但不限于水剂、凝胶、啫喱、乳液、膏霜、贴片精华类、气雾剂类、蜡基类、粉基类、护肤清洁类、护发清洁类、护发类、染烫发类、牙膏类。
7.一种化妆品,其特征在于,所述AdP的添加量占化妆品总质量的0-50PPM。
8.根据权利要求7所述的一种化妆品,其特征在于,所述AdP占化妆品总质量的0.1-30PPM,优选1-20 PPM。
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