[发明专利]一种具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法

说明书

本发明公开了一种具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法，该试剂盒及质粒提取方法旨在解决现有技术下试剂盒内试剂组的功能单一，只能裂解某一类型的细胞，且提取的质粒浓度较低，并且样品最终的内毒素水平较高的技术问题。该试剂盒包括裂解试剂组、杂质去除试剂组、内毒素去除试剂组、质粒回收试剂和内毒素检测试剂，所述裂解试剂组用于裂解细胞，所述裂解试剂组包括试剂一和试剂二。该发明的具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法，将多种试剂集中在一个试剂盒内，便于质粒的提取操作，便于对内毒素水平进行检测，确保对内毒素的去除效果，适用于不同类型的细胞裂解，采用该方法提取的质粒浓度较高。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法。

背景技术

质粒广泛存在于生物界，具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息，细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体，大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。

目前，专利号为CN201710352847.X的发明专利公开了一种质粒提取试剂盒以及提取方法其包括用于裂解细胞的裂 解试剂组、用于去除杂质的洗涤试剂组、质粒溶解试剂和内毒素去除试剂。优选地，所述裂解试剂组由裂解液I、II和III组成，所述裂解液I为包含10mM EDTA、0.1067mg/ml RNase A和25mM Tris-HCl的水溶 液，所述裂解液I的pH为8.0；所述裂解液II为包含0.2M NaOH和质量分数1％的SDS的水溶液；所述裂解液III为包含2-6M盐酸胍和0.5M醋酸钾的水溶液，所述裂解液III的pH为 4.2。优选地，所述洗涤试剂组由洗液A和洗液B组成，所述洗液A为包含6-8M盐酸胍、20mM Tris-HCl和体积分数30-50％乙醇的水溶液， 所述洗液A的pH为6.0；所述洗液B为体积分数75-90％的乙醇水溶液。优选地，所述内毒素去除试剂为包含5-20％TritonX-114的水溶液。其成分简单，方便得到，但该试剂盒内试剂组的功能单一，只能裂解某一类型的细胞，且提取的质粒浓度较低，并且样品最终的内毒素水平较高。

因此，针对上述试剂盒功能单一和的问题，亟需得到解决，以改善试剂盒的使用场景。

发明内容

（1）要解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法，该试剂盒及质粒提取方法旨在解决现有技术下试剂盒内试剂组的功能单一，只能裂解某一类型的细胞，且提取的质粒浓度较低，并且样品最终的内毒素水平较高的技术问题。

（2）技术方案

为了解决上述技术问题，本发明提供了这样一种具有多功能试剂组的无毒型质粒提取试剂盒及质粒提取方法，该试剂盒包括裂解试剂组、杂质去除试剂组、内毒素去除试剂组、质粒回收试剂和内毒素检测试剂，

所述裂解试剂组用于裂解细胞，所述裂解试剂组包括试剂一和试剂二,所述试剂一包含1%的tritonX-100和苯甲基磺酰氟溶液，所述tritonX-100和苯甲基磺酰氟溶液的体积比为100:1.5，所述试剂二包含NP-40 Lysis Buffer和苯甲基磺酰氟溶液,所述NP-40Lysis Buffer和苯甲基磺酰氟溶液的体积比为100:1.5；

所述杂质去除试剂组用于从细胞破碎液得到质粒粗提液，所述杂质去除试剂组包括试剂三和试剂四；

所述质粒回收试剂用于将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒；

所述内毒素去除试剂组用于去除溶液中的内毒素，所述内毒素去除试剂组包括试剂五、试剂六和试剂七，所述试剂五、试剂六和试剂七的体积比为1.5：125:125；

所述内毒素检测试剂用于检测所得的质粒溶液中内毒素含量。