[发明专利]一种发酵产咪唑立宾的正青霉菌株及其应用

说明书

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种发酵产咪唑立宾A的正青霉菌株，并进一步公开其发酵产咪唑立宾的应用。本发明通过常压室温等离子体诱变技术筛选得到一株高产咪唑立宾的正青霉菌FIM‑E‑UN41‑18(Penicillium brefeldianum)，其能够发酵高产咪唑立宾。在发酵实验中，所述正青霉菌FIM‑E‑UN41‑18发酵产咪唑立宾的效价高达1907μg/mL，大幅度提高了咪唑立宾的产量，可实现工业化发酵生产。而且，本发明筛选的菌株FIM‑E‑UN41‑18稳定性良好，连续传代五代其产咪唑立宾效价基本稳定，维持在同一较高水平，能够作为进一步研究和开发的生产菌株。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种发酵产咪唑立宾A的正青霉菌株，并进一步公开其发酵产咪唑立宾的应用。

背景技术

咪唑立宾(mizoribine，MZ)是1971年从霉菌的培养液中分离而得的新型免疫抑制剂，能通过特异性地抑制快速增长的淋巴细胞的分裂和增殖产生免疫抑制作用。咪唑立宾于1991年起在日本应用于临床肾移植，日本许多临床移植中心已将咪唑立宾作为肾移植后的常规免疫抑制药物，我国亦将其作为肾移植抗排斥药广泛应用于临床。据报道，咪唑立宾可用于治疗狼疮性肾炎、类风湿性关节炎、肾病综合征及系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，且有研究报道其对丙型肝炎有明显治疗效果。

目前，国内外生产咪唑立宾的方法主要有化学合成法和微生物发酵法。其中，化学合成咪唑立宾反应步骤多、合成条件苛刻、合成周期长、且产物总收率低，造成生产成本居高不下；微生物发酵生产咪唑立宾系一条经济环保的生产途径，具有生产过程绿色环保的优势，但是，目前分离和筛选到的可用于发酵生产咪唑立宾的菌株存在生物合成能力低或发酵水平不稳定的问题，不具备产业化价值。

目前，针对咪唑立宾发酵菌株改良的选育技术主要采用的是传统选育方法，即紫外诱变结合化学诱变剂等育种手段，已取得一定的效果。如申请人在先前研究中对发酵产咪唑立宾的正青霉菌野生菌E-0509-2进行UV+NTG复合诱变筛选，进而获得诱变菌株E-UN41，其遗传性状相对稳定，发酵水平较出发菌株提高了13倍。该菌株虽然以分子生物学为基础的基因组重排定向构建功能细胞株提供了广阔前景，但要真正实现以这些功能细胞培养来达到改造目标却极其困难；并且由于微生物体内代谢网络的复杂性和多结点性，基因操作后菌株的代谢流往往并不朝着预期设计的方向转移，通常要想得到优良的工业生产菌株难度较大。

常压室温等离子体育种技术(ARTP)是一种微生物基因组快速突变技术，其产生的等离子体富含各种化学活性粒子，对菌株细胞产生遗传物质的损伤、引起细胞膜通透性和蛋白质结构的改变等多重作用，细胞启动SOS修复机制，在修复过程中产生种类丰富的错配位点，该方法突变率高，已在多种工业微生物的菌种选育中得到成功运用。

有鉴于此，如何筛选获得遗传性状稳定且能够高效发酵产咪唑立宾的优良菌株对于咪唑立宾的工业化生产及应用具有积极的意义。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种发酵产咪唑立宾的正青霉菌株，以解决现有技术中咪唑立宾的发酵菌株性能不理想的问题；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述正青霉菌株发酵生产咪唑立宾的应用。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种正青霉菌株，其分类命名为正青霉菌Penicillium brefeldianum FIM-E-UN41-18，已保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广东省广州市越秀区先烈中路100号大院院实验大楼5楼，保藏编号为GDMCC No.61808，保藏日期为2021年07月14日。

本发明还公开了所述正青霉菌株在发酵生产咪唑立宾中的应用。

本发明还公开了一种发酵生产咪唑立宾的方法，包括将所述正青霉菌株接种于适宜的发酵培养基中进行发酵培养的步骤。