[发明专利]小麦抗叶锈病基因Lr29的两个分子标记及其应用

权利要求书

1.小麦抗叶锈病基因Lr29的分子标记，其特征在于，所述分子标记包括：共显性InDel标记XsdauLH3388和共显性CAPS标记Xsdau19A20A；

所述共显性InDel标记XsdauLH3388位于中国春参考基因组第7号染色体(7D)第379323570-379324596bp处，所述InDe1标记为缺失/插入多态性；所述共显性CAPS标记Xsdau19A20A位于中国春参考基因组第7号染色体(7D)第182832530-182833169bp处；所述CAPS标记为酶切扩增多态性。

2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述共显性InDel标记XsdauLH3388的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述共显性CAPS标记Xsdau19A20A的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

3.用于扩增权利要求1或2所述的分子标记的引物，其特征在于，用于扩增共显性InDel标记XsdauLH3388的引物序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于扩增共显性CAPS标记Xsdau19A20A的引物序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

4.一种用于检测权利要求1或2所述分子标记的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物；或者包含SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物。

5.权利要求1或2所述的分子标记、权利要求3所述的引物或权利要求4所述的试剂盒在如下1)-4)至少一项中的应用：

1)小麦抗叶锈病基因Lr29的检测；

2)抗叶锈病小麦株的早期筛选；

3)含有Lr29基因的植株基因型的鉴定；

4)抗叶锈病小麦的育种。

6.一种小麦抗叶锈病基因Lr29的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取待测小麦的基因组DNA并将其作为模板，采用SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物进行PCR扩增，得到第一扩增产物；将第一扩增产物进行电泳检测，若得到长度为923bp的条带，则待测小麦中含有抗叶锈病基因Lr29；

或者，提取待测小麦的基因组DNA并将其作为模板，采用SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的引物进行PCR扩增，得到第二扩增产物；将第二扩增产物用Hpy188Ⅰ限制性内切酶酶切，电泳检测酶切后的扩增产物，若得到序列长度为140bp的条带，则待测小麦中含有抗叶锈病基因Lr29。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，PCR扩增的反应体系为：100ng/μL 的模板DNA 1μL，2xMaster Mix 7.5μL，10μmol/L正向引物及反向引物各0.5μL，ddH₂O 5.5μL；

PCR扩增的反应条件为：预变性95℃3min，变性95℃15s，退火54℃15s，延伸72℃10s，循环数38个循环，后延伸72℃5min，15℃保存。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，酶切的反应体系为：10μL PCR产物，10U/ml Hpy188 Ⅰ 0.3μL，10xCutsmart 1.9μL，1.8μL ddH₂O；

酶切的反应条件为：37℃水浴3h。