[发明专利]一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用

说明书

本发明涉及一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用。利用远杂9102和wt09‑0023为亲本的重组自交系群体，构建高密度连锁图谱，定位到一个能在多个生育期和多年份重复到的抗性主效QTL(qBWR_A12)。以主效QTL两翼的SNP信息开发了KASP引物，获得一个能应用于远杂9102血缘材料和非血缘材料的SNP分子标记，该SNP标记位于第12染色体的4097252bp处，基于该QTL开发的标记与青枯病抗性的连锁性更紧密。该方法免去了青枯病接种鉴定或病圃鉴定的步骤，只用检测SNP基因型就能够快速准确的获得该材料的青枯病抗性信息，且能应用于花生抗青枯病的分子育种中。

技术领域

本发明涉及一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用，属于分子生物学领域。

背景技术

青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性病害，分布范围遍布全世界。青枯病是一种土传病害，病原体主要通过植物根部的伤口感染植物，并在植物维管束系统中迅速传播，导致地上部分缺水萎蔫。雷尔氏菌能侵染包括茄科、十字花科、禾本科等450多种植物，中国有90多种植物受到侵染，其中花生、番茄、烟草等作物在十多个省都发生病害。花生种植受青枯病影响的耕地达到80万公顷，占全国种植面积的近16％。一些病害区减产10～20％，极端情况下减产达到50-100％。

种植抗病品种是青枯病防治最经济环保的方案。花生是自花授粉植物，所以在杂交育种中获得的抗性能够在子代稳定遗传，有利于抗性品种的推广和应用。目前适应不同生态区的抗病品种的育成和应用显著地克服了过去病区种植感病品种时的大面积枯死和绝收的问题，这些抗病品种仍然是中国青枯病疫区的主推品种，仍然具有很高抗性。目前抗病品种选育还是依靠病圃和人工接种鉴定。人工接种菌群较单一，病圃的面积有限，都是抗性育种工作的限制因素。花生基因组的发表和测序技术的发展，让花生育种工作进入了高效分子育种时代。虽然近些年花生开展了青枯病抗性的QTL定位研究，也获得一些抗性标记，为青枯病抗性的研究提供了理论依据，但是依然不能获得理想的分子标记应用于抗青枯病分子标记辅助育种中。

竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR，KASP)可在广泛的基因组DNA样品中(甚至是一些复杂基因组的DNA样品)，对SNPs和特定位点上的InDels进行精准的双等位基因判断。与TaqMan双色标记探针法、MassARRAY分子量阵列技术、Affymetrix SNP芯片相比，KASP技术灵活性更高、试剂成本低，同样成本至少获得两倍的数据量。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用。本发明定位到一个能在多个生育期和多年环境中重复的抗性QTL(qBWR_A12)，以qBWR_A12两翼的SNP信息开发了KASP引物，获得一个能应用于远杂9102血缘材料和非血缘材料的SNP分子标记。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记，所述分子标记为qBWR_A12，位于花生第12染色体的4097252bp处，该位点前后100bp的序列为：

TCGGAACTCGACTCCTAGAATGTCCTTCACCACCTCGTACGTTACAAATGCGATTGCTATGGACGGCACCACCTGCAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTAGAATGCAACAAGAGTAAGGCCACTAAAAGGATTGTACCTCTTGAGTATATTAGATGAGACTGACCTTTACAGAATTTGGCACCAGACCCTTGTATAATGCA；

或